紅裂液的使用在動(dòng)物試驗(yàn)中極其頻繁，其與PBS、生理鹽水、細(xì)胞培養(yǎng)基，并稱實(shí)驗(yàn)室四大液體耗材。然而紅裂液是如何達(dá)到裂解紅細(xì)胞但是又不破壞其他有核細(xì)胞效果的呢，作為一個(gè)不關(guān)心實(shí)驗(yàn)原理，自己也不配紅裂液的實(shí)驗(yàn)小白不禁心有疑慮。
首先我們一起來看看紅裂液的配方，實(shí)驗(yàn)室常用自配紅裂液的主要成分為:碳酸氫鉀（1g），氯化銨（8.3g）以及EDTA.2Na（0.037g），最終用KOH和HCl調(diào)節(jié)PH值至7.2-7.4（此配方為配制1000ml紅裂液）。然后消高壓，4℃儲(chǔ)存、備用。
由于EDTA.2Na的用量很小，如果稱取0.037g必定會(huì)造成較大的稱量誤差，所以我往往會(huì)準(zhǔn)備一瓶EDTA.2Na的儲(chǔ)存液（0.37gEDTA.2Na溶于1000ml ddH2O中，每次配置1000ml紅裂液時(shí)從中吸取100ml儲(chǔ)存液）
接下來讓我們看看配方中紅裂液各個(gè)成分在裂解過程中的作用吧
氯化銨是紅裂液中主要的效應(yīng)物質(zhì)，銨根離子不能透過細(xì)胞膜，而其他離子可以通過，這樣就造成細(xì)胞內(nèi)外離子濃度差異，形成了滲透壓差，外部的水分會(huì)擴(kuò)散至胞內(nèi)，使細(xì)胞膨脹。由于紅細(xì)胞結(jié)構(gòu)相對簡單，因此膨脹的耐受能力較差，絕大部分就會(huì)被漲破。碳酸鹽的主要作用為PH緩沖。EDTA與鎂離子和鈣離子形成的螯合物主要起到破壞細(xì)胞膜穩(wěn)態(tài)的作用，此作用對白細(xì)胞影響很小，所以這種裂解液可以在裂解紅細(xì)胞的同時(shí)較小的影響白細(xì)胞。想要知道更多更細(xì)致的裂解原理。
紅細(xì)胞裂解液的具體用法：
實(shí)驗(yàn)材料：C57小鼠的脾臟；
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模悍蛛x脾臟中淋巴細(xì)胞，流式檢測T細(xì)胞亞群。
2.1500rpm，4℃，離心5min，得到含有紅細(xì)胞的細(xì)胞沉淀，吸棄上清
3. 每管中加入1ml的staining buffer，槍頭吹打重懸后，加入9ml紅裂液，蓋上離心管蓋，上下顛倒混勻后插入冰盒中。
4.裂解3min后離心，1500rpm，4℃，離心5min，得到裂解后的細(xì)胞沉淀。
5. 吸棄上清，用5ml staining buffer重懸（可以用渦旋儀渦一下），200目尼龍膜過膜。
6.1500rpm，4℃，離心5min（此步驟為清洗一遍細(xì)胞沉淀，去除多余的紅裂液）。得到最終的細(xì)胞沉淀。
7. 2-3ml staining buffer重懸沉淀（具體重懸體積視團(tuán)塊大小而定）
8. 細(xì)胞計(jì)數(shù)（以上所有操作，可以在冰上操作的盡量在冰上操作）
細(xì)胞前期的處理當(dāng)然是為了后面的細(xì)胞培養(yǎng)或者流式檢測做準(zhǔn)備的，所以讓我們看看最后的成果怎么樣吧！細(xì)胞狀態(tài)還是不錯(cuò)噠，可以開心的進(jìn)行的研究了。