紅裂液的使用在動物試驗中極其頻繁，其與PBS、生理鹽水、細胞培養(yǎng)基，并稱實驗室四大液體耗材。然而紅裂液是如何達到裂解紅細胞但是又不破壞其他有核細胞效果的呢，作為一個不關(guān)心實驗原理，自己也不配紅裂液的實驗小白不禁心有疑慮。
首先我們一起來看看紅裂液的配方，實驗室常用自配紅裂液的主要成分為:碳酸氫鉀（1g），氯化銨（8.3g）以及EDTA.2Na（0.037g），最終用KOH和HCl調(diào)節(jié)PH值至7.2-7.4（此配方為配制1000ml紅裂液）。然后消高壓，4℃儲存、備用。
由于EDTA.2Na的用量很小，如果稱取0.037g必定會造成較大的稱量誤差，所以我往往會準備一瓶EDTA.2Na的儲存液（0.37gEDTA.2Na溶于1000ml ddH2O中，每次配置1000ml紅裂液時從中吸取100ml儲存液）
接下來讓我們看看配方中紅裂液各個成分在裂解過程中的作用吧
氯化銨是紅裂液中主要的效應物質(zhì)，銨根離子不能透過細胞膜，而其他離子可以通過，這樣就造成細胞內(nèi)外離子濃度差異，形成了滲透壓差，外部的水分會擴散至胞內(nèi)，使細胞膨脹。由于紅細胞結(jié)構(gòu)相對簡單，因此膨脹的耐受能力較差，絕大部分就會被漲破。碳酸鹽的主要作用為PH緩沖。EDTA與鎂離子和鈣離子形成的螯合物主要起到破壞細胞膜穩(wěn)態(tài)的作用，此作用對白細胞影響很小，所以這種裂解液可以在裂解紅細胞的同時較小的影響白細胞。想要知道更多更細致的裂解原理。
紅細胞裂解液的具體用法：
實驗材料：C57小鼠的脾臟；
實驗目的：分離脾臟中淋巴細胞，流式檢測T細胞亞群。
2.1500rpm，4℃，離心5min，得到含有紅細胞的細胞沉淀，吸棄上清
3. 每管中加入1ml的staining buffer，槍頭吹打重懸后，加入9ml紅裂液，蓋上離心管蓋，上下顛倒混勻后插入冰盒中。
4.裂解3min后離心，1500rpm，4℃，離心5min，得到裂解后的細胞沉淀。
5. 吸棄上清，用5ml staining buffer重懸（可以用渦旋儀渦一下），200目尼龍膜過膜。
6.1500rpm，4℃，離心5min（此步驟為清洗一遍細胞沉淀，去除多余的紅裂液）。得到最終的細胞沉淀。
7. 2-3ml staining buffer重懸沉淀（具體重懸體積視團塊大小而定）
8. 細胞計數(shù)（以上所有操作，可以在冰上操作的盡量在冰上操作）
細胞前期的處理當然是為了后面的細胞培養(yǎng)或者流式檢測做準備的，所以讓我們看看最后的成果怎么樣吧！細胞狀態(tài)還是不錯噠，可以開心的進行的研究了。