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丁?;o酶A合成酶3抗體的應(yīng)用

2020/12/7 10:04:30

背景[1-3]

丁酰基輔酶A合成酶3抗體是一類可以特異性結(jié)合丁?;o酶A合成酶3的多克隆抗體,主要用于體外檢測(cè)丁?;o酶A合成酶3的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)。

酰基輔酶A acyl-CoA為脂肪酸與輔酶A的硫醇脂化合物(RCO-CoA)。是脂肪酸合成和分解的活性代謝中間物,水解時(shí)生成脂肪酸和輔酶A。另外在脂肪酸和輔酶A合成時(shí)消耗ATP。

輔酶A(coenzyme A),是一種輔酶,值得注意的是其在合成和氧化脂肪酸的角色,和在三羧酸循環(huán)中氧化丙酮酸。所有基因組測(cè)序日期編碼的酶,即利用輔酶A作為底物,并在4%左右的細(xì)胞酶中使用(或硫酯,例如乙酰-CoA)作為基材。在人類中,輔酶A生物合成需要半胱氨酸、泛酸和三磷酸腺苷(ATP)。主要參與脂肪酸以及丙酮酸的代謝。

輔酶A系自鮮酵母中提取而得,為體內(nèi)乙酰反應(yīng)的輔酶,可與乙酸鹽結(jié)合成為乙酰輔酶A,進(jìn)入氧化過程,對(duì)糖、蛋白質(zhì)及脂肪的代謝有重要作用;體內(nèi)三羧酸循環(huán)、乙酰膽堿的合成、肝糖原的儲(chǔ)存、膽固醇量的降低及血漿脂肪含量的調(diào)節(jié)等,均與輔酶A有密切關(guān)系。

應(yīng)用[4][5]

用于椰肉發(fā)育過程中差異表達(dá)基因的分離和功能注釋研究

利用SSH法構(gòu)建了四個(gè)SSH文庫,并利用Blast2GO軟件對(duì)這些差異表達(dá)序列進(jìn)行了功能注釋。

結(jié)果表明:在隨機(jī)選擇的1272個(gè)序列的克?。總€(gè)文庫約300個(gè)克?。┲?有63%的序列與數(shù)據(jù)庫中已知的蛋白質(zhì)功能類似。通過對(duì)文庫中階段特異性表達(dá)的序列的GO(gene ontology)id比較分析,篩選得到了6個(gè)在椰肉發(fā)育過程中持續(xù)上調(diào)的基因,28個(gè)持續(xù)下調(diào)的基因,28個(gè)先短暫性的上調(diào)后下調(diào)以及9個(gè)先短暫性下調(diào)然后上調(diào)的基因。

以KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)數(shù)據(jù)庫為背景分析發(fā)現(xiàn)差異表達(dá)基因中有溶血磷脂酸?;D(zhuǎn)移酶(LPAAT)、磷脂酶D、乙酰輔酶A羧化酶羧羥基轉(zhuǎn)移酶、3-羥基異丁?;o酶A水解酶和丙酮酸脫氫酶與脂肪酸的合成和分解代謝途徑有關(guān);磷酸丙糖異構(gòu)酶、纖維素合成酶和1,3-β葡聚糖苷酶與糖代謝途徑相關(guān);另外,磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)既與脂肪酸代謝有關(guān)又與糖代謝相關(guān)。

從獲得的737個(gè)非冗余基因中選擇了103個(gè)階段特異性表達(dá)的基因進(jìn)行熒光定量PCR的驗(yàn)證。結(jié)果顯示:SSH文庫所得到的序列有效性高達(dá)66.6%。綜上所述,本研究通過SSH文庫構(gòu)建和生物信息學(xué)分析的方法獲得了一系列與椰肉發(fā)育過程中組織發(fā)育、脂肪酸代謝、糖代謝和次生代謝相關(guān)的功能基因。

研究的進(jìn)行將更好地揭示椰肉發(fā)育的調(diào)控方式,為最終克隆影響椰肉發(fā)育及物質(zhì)代謝的關(guān)鍵基因,并從分子水平上改良果實(shí)發(fā)育和成熟特性提供更可靠的理論依據(jù)。同時(shí),獲得的椰子胚乳組織特異表達(dá)基因?qū)槠渌锓N果實(shí)品質(zhì)的改良提供參考資源。

參考文獻(xiàn)

[1]Effect of early cold stress on the maturation of rice anthers.Imin Nijat,Kerim Tursun,Rolfe Barry G,Weinman Jeremy J.Proteomics.2004

[2]Photosynthesis and carbon partitioning in transgenic tobacco plants deficient in leaf cytosolic pyruvate kinase.Grodzinski,Jiao,Knowles,Plaxton.Plant Physiology.1999

[3]Production of medium chain saturated fatty acids with enhanced antimicrobial activity from crude coconut fat by solid state cultivation of Yarrowia lipolytica.Parfene Georgiana,Horincar Vicentiu,Tyagi Amit Kumar,Malik Anushree,Bahrim Gabriela.Food Chemistry.2012

[4]Pyruvate kinase:current status of regulatory and functional properties.Ma.Enriqueta Muoz,Elizabeth Ponce.Comparative Biochemistry and Physiology Part B Biochemistry Molecular Biology.2003

[5]梁遠(yuǎn)學(xué).椰肉發(fā)育過程中差異表達(dá)基因的分離和功能注釋[D].海南大學(xué),2014.

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