背景[1-3]
ANTI-HUMAN TNF-ALPHA是以ANTI-HUMAN TNF-ALPHA為抗原的免疫蛋白，可以特異性結(jié)合HUMAN TNF-ALPHA，主要用于檢測HUMAN TNF-ALPHA的Western blotting、Immunohistocry、ELISA、IF、IHC-P、IHC-F等生物實驗。
TNF主要由活化的巨噬細胞，NK細胞及T淋巴細胞產(chǎn)生。1985年Shalaby把巨噬細胞產(chǎn)生的TNF命名為TNF-α，把T淋巴細胞產(chǎn)生的淋巴毒素（lymphotoxin，LT)命名為TNF-β。雖然TNF-α與TNF-β僅有約30%的同源性，但它們卻擁有共同的受體。TNFα的生物學活性占TNF總活性的70%～95%，因此目前常說的TNF多指TNF-α。
人TNF-α前體由233個氨基酸組成（26 kDa），其中包含由76個氨基酸殘基組成的信號肽，在TNF轉(zhuǎn)化酶TACE的作用下，切除信號肽，形成成熟的157個氨基酸殘基的TNF-α（17 kDa）。由于沒有蛋氨酸殘基，故不存在糖基化位點，其中第69位和101位兩個半胱氨酸形成分子內(nèi)二硫鍵。
人類TNF-α與小鼠TNF-α有79%氨基酸組成同源性，TNF-α的生物學作用似無明顯的種屬特異性。最近有人報道通過基因工程技術(shù)表達了N端少2個氨基酸（Val、Arg）的155氨基酸人TNF-α，具有更好的生物學活性和抗腫瘤效應(yīng)。此外，還有用基因工程方法，將TNF-α分子氨基端7個氨基酸殘基缺失，再將8Pro、9Ser和10Asp改為8Arg、9Lys和10Arg，或者再同時將157Leu改為157Phe，改構(gòu)后的TNF-α比天然TNF體外殺傷L929細胞的活性增加1000倍左右，在體內(nèi)腫瘤出血壞死效應(yīng)也明顯增加。TNF-α和β發(fā)揮生物學效應(yīng)的天然形式是同源的三聚體。
應(yīng)用[4][5]
用于骨痹合劑對大鼠膝骨性關(guān)節(jié)炎模型IL-1β、TNF-α表達的影響及其頸椎退變的實驗研究
觀察骨痹合劑對該模型IL-1β和TNF-α表達的影響,同時探討該模型大鼠頸椎退變的可能作用機制。
方法:選用懷孕15日齡的SD大鼠12只,分別置于不同的籠子中飼養(yǎng),把出生第10天的40只幼鼠,按體重大小排序后隨機分為四組,分別為空白對照組、生理鹽水組、氨糖美辛組、骨痹合劑組,每組10只。四組均在腹腔麻醉下手術(shù)去除雙前肢,手術(shù)后置于原母鼠飼養(yǎng)籠內(nèi)繼續(xù)飼養(yǎng),再去除雙前肢四個月后右膝關(guān)節(jié)行Hulth法手術(shù)。
骨痹合劑組按0.5m L/100g體重給予骨痹合劑灌胃;氨糖美辛組給予氨糖美辛腸溶片2mg/100g,置于同體積的蒸餾水中待其融化搖勻后,給予灌胃;生理鹽水組按0.5ml/100g體重給予生理鹽水灌胃;空白對照組不做任何干預,持續(xù)4周時間為干預過程。然后麻醉處死相對應(yīng)的各組大鼠,取下右膝關(guān)節(jié)、頸椎通過固定、脫鈣、脫水、包埋、切片、撈片、烤片,行HE染色、甲苯胺藍染色、藏紅固綠染色及IL-1β、TNF-α免疫組化檢測。
結(jié)果:右膝關(guān)節(jié)HE染色、藏紅固綠染色、甲苯胺藍染色三種染色中空白對照組、生理鹽水組較氨糖美辛組、骨痹合劑組的關(guān)節(jié)軟骨表層欠光滑,部分關(guān)節(jié)表面出現(xiàn)了斷裂和裂隙,軟骨細胞分布不均勻且排序不整齊,軟骨細胞各層次模糊,可見細胞簇集現(xiàn)象,潮線不完整,局部染色不均勻,關(guān)節(jié)軟骨部分淡染失染。IL-1β和TNF-α免疫組化染色顯示空白對照組和生理鹽水組較氨糖美辛組、骨痹合劑組陽性細胞表達率高。
參考文獻
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