背景[1-3]
Rabbit anti-PKC alpha Polyclonal Antibody是以anti-PKC alpha為抗原以兔為宿主制得的免疫抗體，可以特異性結(jié)合PKC alpha。主要用于檢測(cè)PKC alpha的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多種免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)。
PKC的所有亞類(lèi)都由一條單肽鏈組成（圖8-11），分子量大約為67-83kDa，其結(jié)構(gòu)可分為四個(gè)保守區(qū)C1-C4（mPKC和aPKC缺少C2區(qū)）和五個(gè)可變區(qū)V1-V5?；蠧1區(qū)可能是膜結(jié)合區(qū)，并且含有富含半胱氨酸的隨機(jī)重復(fù)序列Cys-X2-Cys-X13(14)-Cys-X2-Cys-X7-Cys-X7-Cys（X代表任何一種氨基酸），這段順序與在許多金屬-蛋白質(zhì)及轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)有關(guān)的DNA結(jié)合蛋白中的半胱氨酸-鋅-DNA結(jié)合指形區(qū)（cysteine-Zinc-DNabinding finger）保守順序Cys-X2-Cys-X13-Cys-X2-Cys相似。
對(duì)PKC的多肽片段進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，該序列與佛波酯和二酰基甘油（DAG）的結(jié)合有關(guān)。C2區(qū)與PKC對(duì)Ca2+的敏感性有關(guān)。C1和C2在結(jié)構(gòu)上不同于其它蛋白激酶，能結(jié)合Ca2+、磷脂、DAG和TPA，因此C1和C2區(qū)又稱(chēng)為調(diào)節(jié)區(qū)。C3區(qū)包括一個(gè)ATP結(jié)合序列Gly-X-Gly-X-X-Gly-Lys,該區(qū)域與其它蛋白激酶的ATP結(jié)合位點(diǎn)具有很高的同源性，又稱(chēng)催化區(qū)。C4區(qū)包含一個(gè)底物結(jié)合區(qū)，是識(shí)別磷酸化底物所必需的。
已發(fā)現(xiàn)了至少11種亞型,其結(jié)構(gòu)有一定的保守性而又有所差別,導(dǎo)致其功能和調(diào)控的多樣性。新合成的PKC一般需要經(jīng)歷活化莖環(huán)(Activation-loop,A-loop)、轉(zhuǎn)角模體(Turn motif,TM)以及疏水模體(hydrophobic motif,HM)的程序性磷酸化過(guò)程才能成熟,獲得進(jìn)一步活化的功能。
應(yīng)用[4][5]
用于PKCα和p38MAPK通路在電針刺介導(dǎo)的兔內(nèi)毒素休克急性肺損傷血紅素氧合酶-1表達(dá)上調(diào)中的作用研究
探討PKCa和p38MAPK信號(hào)通路在電針刺介導(dǎo)的兔內(nèi)毒素休克急性肺損傷時(shí)HO-1表達(dá)上調(diào)中的作用。
方法健康雄性新西蘭大白兔140只,體重1.5～2.0kg,2月齡,實(shí)驗(yàn)分成兩部分進(jìn)行,每部分70只,均采用隨機(jī)數(shù)字表法,將其分為7組(n=10),假手術(shù)組(S)、無(wú)水乙醇組(AL)、PKC阻斷劑白屈菜赤堿組(CHE)、內(nèi)毒素休克急性肺損傷組(L)、電針刺+內(nèi)毒素休克急性肺損傷組(EA)、假針刺+內(nèi)毒素休克急性肺損傷組(NEA)、電針刺+內(nèi)毒素休克急性肺損傷+白屈菜赤堿組(EAC)。
假手術(shù)組(S)、無(wú)水乙醇組(AL)、p38MAPK特異阻斷劑SB203580組(SB)、內(nèi)毒素休克肺損傷模型組(M)、電針刺+內(nèi)毒素休克肺損傷模型組(EAM)、假針刺+內(nèi)毒素休克肺損傷模型組(SEAM)、電針刺+內(nèi)毒素休克肺損傷模型+SB203580組(EAMS)。EA組、EAC組和EAM組、EAMS組電針刺激雙側(cè)足三里和肺俞穴,疏密波,頻率2/15Hz,刺激強(qiáng)度1-2mA,以兔出現(xiàn)輕微肌顫為宜,30min次,1次/d,連續(xù)5d(1-4d進(jìn)行電針刺預(yù)處理),實(shí)驗(yàn)當(dāng)天電針刺激從給予LPS持續(xù)至實(shí)驗(yàn)結(jié)束；NEA組和SEAM組刺激雙側(cè)足三里和肺俞穴旁開(kāi)0.5cm非經(jīng)非穴處。
L組、EA組、NEA組、EAC組和M組、SEAM組、EAM組、EAMS組耳緣靜脈注射LPS5mg/kg(溶于2ml生理鹽水),其余組給予等容量生理鹽水。在靜脈注射LPS或生理鹽水前0.5h,EAC組和CHE組腹腔注射白屈菜赤堿8mg/kg(溶于0.5ml無(wú)水乙醇中),SB組和EAMS組靜脈注射SB2035805μmol/kg(溶于0.5ml無(wú)水乙醇),S組靜脈注射等容量生理鹽水,其余各組靜脈注射無(wú)水乙醇0.5m1。靜脈注射LPS各組以MAP在2h內(nèi)下降至基礎(chǔ)值75%為模型成功標(biāo)志。
靜脈注射LPS(或生理鹽水)6h時(shí),右頸內(nèi)動(dòng)脈取血,測(cè)定血清TNF-α濃度,處死大白兔取肺組織,觀察病理學(xué)結(jié)果并進(jìn)行病理學(xué)評(píng)分,測(cè)定肺濕/干重比率(W/D)以及MDA含量和SOD活性；采用western blot法測(cè)定HO-1和PKCa或p38MAPK、p-p38MAPK蛋白表達(dá)；采用熒光定量PCR法測(cè)定HO-lmRNA和PKCαmRNA表達(dá)。
參考文獻(xiàn)
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[3]Reactive oxygen species and PI3K/Akt signaling play key roles in the induction of Nrf2-driven heme oxygenase-1 expression in sulforaphane-treated human mesothelioma MSTO-211H cells[J].Yoon-Jin Lee,Hyang-Yun Jeong,Yong-Bae Kim,Yong-Jin Lee,Seong Youn Won,Jung-Hyun Shim,Moon-Kyun Cho,Hae-Seon Nam,Sang-Han Lee.Food and Chemical Toxicology.2011(2)
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[5]張桂誠(chéng).PKCα和p38MAPK通路在電針刺介導(dǎo)的兔內(nèi)毒素休克急性肺損傷血紅素氧合酶-1表達(dá)上調(diào)中的作用[D].天津醫(yī)科大學(xué),2014.