背景[1-3]
小鼠抗GAPDH單克隆抗體是一類可以特異性結(jié)合GAPDH的鼠源單克隆抗體，主要用于檢測(cè)GAPDH的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多種免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)。
檢測(cè)原理：雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中GAPDH水平。用純化的GAPDH抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入GAPDH，再與HRP標(biāo)記的GAPDH抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的GAPDH呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中GAPDH濃度。
GAPDH或G3PDH是甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase）的英文縮寫。GAPDH是糖酵解反應(yīng)中的一個(gè)酶，廣泛分布于各種組織中的細(xì)胞。
GAPDH（甘油醛-3-磷酸脫氫酶）是參與糖酵解的一種關(guān)鍵酶，由4個(gè)30-40kDa的亞基組成，分子量146kDa，檢測(cè)條帶大約在36kDa。GAPDH基因幾乎在所有組織中都高水平表達(dá)，廣泛用作Western blot蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)化的內(nèi)參。因?yàn)镚APDH作為管家基因在同種細(xì)胞或者組織中的蛋白質(zhì)表達(dá)量一般是恒定的，因此在使用GAPDH內(nèi)參抗體時(shí)，將每個(gè)樣品測(cè)得的目的蛋白含量與本樣品的GAPDH含量相除，得到每個(gè)樣品目的蛋白的相對(duì)含量，然后才進(jìn)行樣品與樣品之間的比較。
應(yīng)用[4][5]
用于海洋魚類細(xì)菌性病原微生物GAPDH蛋白的定位和功能初步研究
對(duì)海洋魚類病原微生物GAPDH蛋白的定位研究中,成功克隆了六種病原菌GAPDH編碼基因,并實(shí)現(xiàn)了六個(gè)基因在大腸桿菌中的重組表達(dá)；進(jìn)一步制備了遲鈍愛德華氏菌EIB202重組蛋白GAPDH的多克隆抗體；在此基礎(chǔ)上通過Western blotting、間接免疫熒光觀察、流式細(xì)胞儀分析等,發(fā)現(xiàn)選取的六種魚類重要病原菌遲鈍愛德華氏菌、鯰魚遲鈍愛德華氏菌、嗜水氣單孢菌、鰻弧菌、溶藻弧菌和哈維氏弧菌中GAPDH蛋白均有向胞外分泌,同時(shí)細(xì)胞表面也有分布。
而以斑馬魚為實(shí)驗(yàn)對(duì)象的GAPDH重組蛋白相對(duì)免疫保護(hù)率分析表明,來源于不同病原菌的重組蛋白均具有明顯的免疫保護(hù)作用,且相互間有一定的交叉免疫保護(hù)。最后分析了遲鈍愛德華氏菌EIB202的GAPDH過表達(dá)菌株對(duì)EPC細(xì)胞的侵染能力,結(jié)果發(fā)現(xiàn)GAPDH與病原菌的黏附有一定的相關(guān)性。上述研究結(jié)果的取得為未來利用GAPDH蛋白作為廣譜型保護(hù)性抗原蛋白,開發(fā)針對(duì)養(yǎng)殖水體多病原的亞單位疫苗提供了優(yōu)選靶標(biāo),而遲鈍愛德華氏菌中GAPDH蛋白功能的初步分析,則為后續(xù)其在魚類致病機(jī)制中的功能研究奠定了基礎(chǔ)。
參考文獻(xiàn)
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