背景[1-3]
ANTI-NESTIN抗體是一類可以特異性結(jié)合ANTI-NESTIN的多克隆抗體，主要用于檢測ANTI-NESTIN的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多種免疫學(xué)實驗。
檢測原理：雙抗體夾心法測定標本中ANTI-NESTIN水平。用純化的ANTI-NESTIN抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入ANTI-NESTIN，再與HRP標記的ANTI-NESTIN抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的ANTI-NESTIN呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中ANTI-NESTIN濃度。
NESTIN為第VI類中間絲蛋白，其分子量為220KD?250KD，位于1號染色體23.1q。巢蛋白基因含有三個內(nèi)含子和四個外顯子，三個內(nèi)含子中有兩個是與神經(jīng)Nestin合成的蛋白分為三個區(qū)域，N端（1-7aa），α螺旋區(qū)（8-313）和N端（314-）。絲共享的，充分表明Nestin與神經(jīng)絲來自于一個祖先的可能性。1621aa），α螺旋區(qū)被分為四個部分（1A，1B，2A，2B）。
Nestin是一種屬于第Ⅵ類中間絲的細胞骨架蛋白,表達于多種組織的干細胞或前體細胞中,被廣泛用作干細胞的標志性蛋白。除維持細胞的正常形態(tài),nestin還具有抗凋亡作用。抑制細胞中nestin的表達,可以增強過氧化氫(H202)刺激誘導(dǎo)的神經(jīng)前體細胞和血管平滑肌細胞的凋亡,而將野生型的nestin(nest-1893)轉(zhuǎn)入到細胞內(nèi)可起到保護作用,顯著減少H202誘導(dǎo)的細胞凋亡。
應(yīng)用[4][5]
用于中間絲蛋白Nestin在糖尿病腎病發(fā)病中的作用及機制研究
通過建立糖尿病大鼠模型和體外培養(yǎng)條件性永生化足細胞,探討nestin在糖尿病腎小球足細胞損傷中的作用及機制,為進一步闡明糖尿病腎病的發(fā)病機制及其防治提供理論依據(jù)。
方法：中間絲蛋白Nestin在糖尿病大鼠腎組織的表達Wistar大鼠隨機分為2組：對照組(Control)和糖尿病組(Diabetes mellitus,DM)。DM組大鼠按65mg/kg體重腹腔注射STZ(溶于0.1M的無菌檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液,pH4.5),對照組大鼠注射等量的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液。48h后測定血糖和尿糖,血糖≥16.7mmol/L且尿糖陽性者(+++-++++)作為糖尿病(DM)大鼠。
分別于成模后4、8、12、16周,每組各取5只大鼠,留取24h尿液和血清后,處死大鼠切取腎臟。部分腎組織分別置于4%多聚甲醛和4%的戊二醛固定液中固定,用于光鏡、免疫組織化學(xué)和電鏡檢測；
部分腎臟皮質(zhì)用于分離腎小球,提取腎小球總RNA和蛋白。免疫組織化學(xué)和Western blot檢測腎小球內(nèi)nestin、p-nestin、vimentin、Cdk5/p35蛋白的表達；
免疫熒光雙染色檢測nestin與vimentin、Cdk5、WT1、α-SMA、synaptopodin、laminin等的共同表達情況；免疫共沉淀檢測nestin與vimentin蛋白的結(jié)合情況；Real-time PCR檢測腎小球中nestin、vimentin和Cdk5m RNA的表達。
參考文獻
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[2]Involvement of cyclin‐dependent kinase‐5 in the kainic acid‐mediated degeneration of glutamatergic synapses in the rat hippocampus[J].NooraPutkonen,Jyrki P.Kukkonen,GuiseppaMudo,JaanaPutula,NataleBelluardo,DanLindholm,LauraKorhonen.European Journal of Neuroscience.2011(8)
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