背景^[1-3]

RAT ANTI C-MYC是一類可以特異性結(jié)合ANTI-C-MYC的抗大鼠多克隆抗體，主要用于檢測大鼠模型ANTI-C-MYC的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多種免疫學(xué)實驗。

檢測原理：雙抗體夾心法測定標(biāo)本中ANTI-C-MYC水平。用純化的ANTI-C-MYC抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入ANTI-C-MYC，再與HRP標(biāo)記的ANTI-C-MYC抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的ANTI-C-MYC呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中ANTI-C-MYC濃度。

c-myc基因是myc基因家族的重要成員之一，c-myc基因既是一種可易位基因，又是一種多種物質(zhì)調(diào)節(jié)的可調(diào)節(jié)基因，也是一種可使細(xì)胞無限增殖，獲永生化功能，促進(jìn)細(xì)胞分裂的基因，myc基因參于細(xì)胞凋零，c-myc基因與多種腫瘤發(fā)生發(fā)展有關(guān)。

C-myc基因的產(chǎn)物為62KD的磷酸化蛋白P62c-mgc，是由C-myc基因的外顯子2和3共同編碼的由439個氨基酸組成的蛋白質(zhì)，定位細(xì)胞核內(nèi)，為核蛋白，依C-one編碼產(chǎn)物，功能分類，C-myc癌基因?qū)俸说鞍谆?，具有轉(zhuǎn)化細(xì)胞的能力，并具有與染色體、DNA結(jié)合的特性，在調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、分化及惡性轉(zhuǎn)化中發(fā)揮作用。

C-Myc蛋白在結(jié)構(gòu)上可分為轉(zhuǎn)錄激活區(qū)，非特異DNA結(jié)合區(qū)，核靶序列，堿性區(qū)，螺旋一環(huán)一螺旋(HLH)及亮氨酸拉鏈區(qū)，在已知的轉(zhuǎn)錄因子中可介導(dǎo)蛋白的寡聚化，這兩個區(qū)同時存在是C-myc蛋白所特有的，在其它蛋白質(zhì)中，很少發(fā)現(xiàn)。在C-Myc蛋白中，螺旋一環(huán)一螺旋緊隨著堿性區(qū)，揭示其以特異性序列方式和DNA相互作用

應(yīng)用^[4][5]

用于基于c-Myc/CLIC4通路探究脂多糖致大鼠海馬損傷的致病機制研究

通過建立內(nèi)毒素血癥模型,從組織水平、細(xì)胞水平及分子水平三個層次探究LPS致海馬損傷的發(fā)生發(fā)展機制。

應(yīng)用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)對PC12細(xì)胞進(jìn)行基因編輯,從而驗證c-Myc/CLIC4通路在LPS誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡中的作用機制。為LPS致海馬損傷的發(fā)病機制提供新思路,并為今后臨床開展內(nèi)毒素血癥致海馬損傷的治療及進(jìn)行相關(guān)的機制研究提供理論依據(jù)及試驗基礎(chǔ)。

在體試驗選取36只健康雄性SD大鼠,隨機均分為CON組和LPS組。LPS組腹腔注射1 mL/kg LPS(10 mg/mL),CON組腹腔注射1 mL/kg生理鹽水。造模4 h后經(jīng)心臟采血并處死大鼠,開顱,分離大腦皮層后取海馬備用。

通過檢測大鼠血清中相關(guān)炎癥指標(biāo),觀察海馬組織病理學(xué)變化,觀察海馬超微組織結(jié)構(gòu)變化,檢測線粒體途徑凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)量,以及檢測c-Myc/CLIC4通路的mRNA水平及蛋白表達(dá)量,闡明線粒體凋亡途徑在LPS致海馬損傷中的致病機制,并探究c-Myc/CLIC4通路是否參與對線粒體凋亡途徑的調(diào)控。

體外試驗中,選用PC12細(xì)胞,分成5組,分別為CON組,LPS組,sgc-Myc組,sgCLIC4組,sgCON組。sgc-Myc組,sgCLIC4組細(xì)胞分別用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)編輯c-Myc基因、CLIC4基因。

并做如下處理:CON組更換新完全培養(yǎng)基;其他各組更換含200μg/mL LPS的完全培養(yǎng)基。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù),Annexin V-FITC及Western blot等方法檢測敲除c-Myc及CLIC4基因后細(xì)胞凋亡水平的變化,從而證實c-Myc/CLIC4通路對線粒體凋亡途徑的調(diào)控作用。

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