背景[1-3]
ANTI-TRAIL抗體是一類可以特異性結(jié)合ANTI-TRAIL的多克隆抗體，主要用于檢測(cè)ANTI-TRAIL的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多種免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)。
檢測(cè)原理：雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中ANTI-TRAIL水平。用純化的ANTI-TRAIL抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入ANTI-TRAIL，再與HRP標(biāo)記的ANTI-TRAIL抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的ANTI-TRAIL呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中ANTI-TRAIL濃度。
TRAIL屬于II型跨膜蛋白,含有281個(gè)氨基酸(鼠科動(dòng)物有291個(gè))。膜結(jié)合的TRAIL可以被半胱氨酸蛋白酶切割,形成可溶性TRAIL進(jìn)入外周循環(huán)。可溶性TRAIL主要來(lái)源于激活的白細(xì)胞,如單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞。
可溶性的TRAIL通過(guò)其230位的半胱氨酸殘基與二價(jià)鋅離子相互螯合,促進(jìn)TRAIL形成有活性的同源三聚體,進(jìn)而與相應(yīng)的受體結(jié)合發(fā)揮不同的生物學(xué)效應(yīng)。TRAIL有強(qiáng)大的抗腫瘤活性,并且作為癌癥治療靶點(diǎn)已進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段。TRAIL除了可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡,對(duì)心血管系統(tǒng)也有強(qiáng)大的保護(hù)效應(yīng),例如TRAIL基因缺失會(huì)增加高血脂小鼠的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積。
然而在體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),一定劑量的TRAIL同樣可以刺激內(nèi)皮細(xì)胞凋亡,VSMCs增殖和遷移,泡沫細(xì)胞形成等,這些結(jié)果提示增加TRAIL用量也會(huì)促進(jìn)血管炎癥反應(yīng),導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化等不良效應(yīng)。
應(yīng)用[4][5]
用于雌激素通過(guò)TRAIL抑制TNF-α誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞增殖和遷移的機(jī)制研究
腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(Tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)可調(diào)節(jié)心血管功能。TRAIL作為細(xì)胞因子TNF家族的同系物,最早于20年前被發(fā)現(xiàn),也被稱為Apo-2配體(Apo-2L)或TNF超家族10(TNFSF10)。
TRAIL與Fas有23%同源性,與TNG-a有19%同源性。人的TRAIL屬于II型跨膜蛋白,含有281個(gè)氨基酸(鼠科動(dòng)物有291個(gè))。膜結(jié)合的TRAIL可以被半胱氨酸蛋白酶切割,形成可溶性TRAIL進(jìn)入外周循環(huán)?？扇苄訲RAIL主要來(lái)源于激活的白細(xì)胞,如單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞。
可溶性的TRAIL通過(guò)其230位的半胱氨酸殘基與二價(jià)鋅離子相互螯合,促進(jìn)TRAIL形成有活性的同源三聚體,進(jìn)而與相應(yīng)的受體結(jié)合發(fā)揮不同的生物學(xué)效應(yīng)。TRAIL有強(qiáng)大的抗腫瘤活性,并且作為癌癥治療靶點(diǎn)已進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段。TRAIL除了可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡,對(duì)心血管系統(tǒng)也有強(qiáng)大的保護(hù)效應(yīng),例如TRAIL基因缺失會(huì)增加高血脂小鼠的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積。
然而在體外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),一定劑量的TRAIL同樣可以刺激內(nèi)皮細(xì)胞凋亡,VSMCs增殖和遷移,泡沫細(xì)胞形成等,這些結(jié)果提示增加TRAIL用量也會(huì)促進(jìn)血管炎癥反應(yīng),導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化等不良效應(yīng)。
對(duì)VSMCs中TNF-a誘導(dǎo)的TRAIL表達(dá)影響為了探討E2對(duì)VSMCs中TNF-a誘導(dǎo)的TRAIL表達(dá)影響,分別采用ELISA和實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)TRAIL蛋白和mRNA表達(dá)水平,并用MTT法和細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)觀察E2對(duì)TNF-a誘導(dǎo)的VSMCs增殖和遷移的影響。
參考文獻(xiàn)
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[5]李恒昌.雌激素通過(guò)TRAIL抑制TNF-α誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞增殖和遷移的機(jī)制研究[D].南方醫(yī)科大學(xué),2016.