背景[1-3]
MONOCLONAL ANTI-GAPDH小鼠抗是一類可以特異性結(jié)合ANTI-GAPDH的單克隆抗體，主要用于檢測ANTI-GAPDH的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多種免疫學(xué)實驗。
檢測原理：雙抗體夾心法測定標(biāo)本中ANTI-GAPDH水平。用純化的ANTI-GAPDH抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入ANTI-GAPDH，再與HRP標(biāo)記的ANTI-GAPDH抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的ANTI-GAPDH呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中ANTI-GAPDH濃度。
GAPDH或G3PDH是甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase）的英文縮寫。GAPDH是糖酵解反應(yīng)中的一個酶，廣泛分布于各種組織中的細胞。
GAPDH（甘油醛-3-磷酸脫氫酶）是參與糖酵解的一種關(guān)鍵酶，由4個30-40kDa的亞基組成，分子量146kDa，檢測條帶大約在36kDa。GAPDH基因幾乎在所有組織中都高水平表達，廣泛用作Western blot蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)化的內(nèi)參。因為GAPDH作為管家基因在同種細胞或者組織中的蛋白質(zhì)表達量一般是恒定的，因此在使用GAPDH內(nèi)參抗體時，將每個樣品測得的目的蛋白含量與本樣品的GAPDH含量相除，得到每個樣品目的蛋白的相對含量，然后才進行樣品與樣品之間的比較。
應(yīng)用[4][5]
用于GAPDH過表達及異常聚集在帕金森病發(fā)病機制中作用的研究
魚藤酮對GAPDH的表達、定位及聚集的影響節(jié)魚藤酮對GAPDH的表達、亞細胞定位及糖酵解活性的影響目的研究魚藤酮對PC12細胞內(nèi)糖酵解關(guān)鍵酶GAPDH的表達、亞細胞定位及糖酵解活性的影響。
方法魚藤酮作用于體外培養(yǎng)的神經(jīng)生長因子誘導(dǎo)分化的PC12細胞，采用FITC-Annexin V／PI染色，用流式細胞儀檢測細胞凋亡水平；通過實時熒光定量PCR(real-time PCR)和蛋白免疫印跡分析(Western blot)檢測魚藤酮對PC12細胞內(nèi)GAPDH mRNA和蛋白表達水平的影響；使用亞細胞組分分離及Western blot觀察GAPDH的亞細胞定位改變；根據(jù)比爾定律采用分光光度法測定魚藤酮處理后細胞內(nèi)GAPDH糖酵解活性的改變。
結(jié)果流式細胞儀檢測結(jié)果顯示，魚藤酮可時間依賴性的誘發(fā)PC12細胞凋亡。實時熒光定量PCR及蛋白免疫印跡分析顯示，魚藤酮處理后細胞內(nèi)GAPDH mRNA和蛋白表達水平均隨時間的延長呈升高趨勢；而隨處理時間的延長，GAPDH的糖酵解酶活性反而下降；亞細胞組分分離及Western blot進一步證實，魚藤酮處理后GAPDH主要在細胞核及線粒體組分內(nèi)增多。
結(jié)論魚藤酮可以誘發(fā)GAPDH的過表達、抑制GAPDH糖酵解活性并導(dǎo)致GAPDH亞細胞定位的改變，這可能是魚藤酮誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)元凋亡的重要機制之一。
參考文獻
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[2]Role of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase in vesicular transport from Golgi apparatus to endoplasmic reticulum[J].A.V.Bryksin,P.P.Laktionov.Biochemistry(Moscow).2008(6)
[3]On the key role played by altered protein conformation in Parkinson’s disease[J].L.F.Agnati,E.Baldelli,N.Andreoli,A.S.Woods,V.Vellani,D.Marcellino,D.Guidolin,K.Fuxe.Journal of Neural Transmission.2008(9)
[4]Chronic inhalation of rotenone or paraquat does not induce Parkinson’s disease symptoms in mice or rats[J].Ana I.Rojo,Carmen Cavada,María Rosa de Sagarra,Antonio Cuadrado.Experimental Neurology.2007(1)
[5]黃金莎.GAPDH過表達及異常聚集在帕金森病發(fā)病機制中作用的研究[D].華中科技大學(xué),2009.