背景[1-3]
基因組DNA提取試劑盒是根據(jù)氯化芐法構(gòu)建的，能夠從樣本中提取基因組DNA的試劑盒。氯化芐具有能將含有纖維素等的細(xì)胞壁中的羥基芐基化，從而破壞細(xì)胞壁的特性。試劑盒利用了氯化芐的這一特性，將植物樣品凍結(jié)融解后，再使用Pipet Tip的尖端將植物樣品在Microtube壁上數(shù)次按壓即可破壞細(xì)胞壁。本法與傳統(tǒng)方法相比，省去了液氮研磨等煩瑣步驟，有利于一次性處理大量樣品。而且，本制品經(jīng)過(guò)了改良，熱處理時(shí)間只需15分鐘，使用試劑盒從實(shí)驗(yàn)開(kāi)始至水相回收只需30分鐘時(shí)間。
得到的基因組DNA可以進(jìn)行PCR擴(kuò)增及限制酶處理等。劑盒純化得到的基因組DNA的長(zhǎng)度最長(zhǎng)可達(dá)50kb左右，平均為30kb左右，最短為100bp的DNA也可以被純化。如需獲得更長(zhǎng)的基因組DNA，對(duì)于哺乳動(dòng)物樣品，包括組織或細(xì)胞等，可以使用哺乳動(dòng)物基因組DNA抽提試劑盒。通過(guò)試劑盒獲得的總DNA，OD260/OD280的范圍通常在1.7至1.9之間。
DNA提取試劑盒主要可以分為以下幾大類：小量全血基因組DNA提取試劑盒、中量全血基因組DNA提取試劑盒、組織/細(xì)胞基因組DNA提取試劑盒、中量/大量組織/細(xì)胞基因組DNA提取試劑盒、全血/組織/細(xì)胞基因組DNA提取試劑盒、CTAB植物基因DNA提取試劑盒、新型植物基因組DNA提取試劑盒、酵母基因組DNA提取試劑盒、M13噬菌體單鏈基因組DNA提取試劑盒。
應(yīng)用[4][5]
用于環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）技術(shù)檢測(cè)旋毛蟲(chóng)DNA的研究
通過(guò)建立高、中、低3種不同劑量旋毛蟲(chóng)感染小鼠模型,收集感染早期階段的肌肉、血液、糞便樣本進(jìn)行LAMP檢測(cè),驗(yàn)證了該方法的高度敏感性和特異性,特別是對(duì)于肌肉中幼蟲(chóng)密度非常低時(shí),該技術(shù)更突顯其重要的檢測(cè)和診斷價(jià)值。
研究證明LAMP法比PCR法更敏感、快速、簡(jiǎn)便,有望在提高人及動(dòng)物旋毛蟲(chóng)病的早期診斷,旋毛蟲(chóng)病的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)、肉類檢疫及流行病學(xué)調(diào)查等領(lǐng)域發(fā)揮更大作用。材料和方法：旋毛蟲(chóng)蟲(chóng)種、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、基因組DNA的提取本實(shí)驗(yàn)所用的蟲(chóng)種,旋毛蟲(chóng)河南豬源株(Trichinella spiralis,T1),北方旋毛蟲(chóng)(T.nativa,T2)、偽旋毛蟲(chóng)(T.pseudospiralis,T4)、南方旋毛蟲(chóng)(納氏旋毛蟲(chóng),T.nelsoni,T7),來(lái)自國(guó)際旋毛蟲(chóng)參考中心(International Trichinella Reference Centre,ITRC)本實(shí)驗(yàn)室昆明小鼠傳代保種。
其他人體寄生蠕蟲(chóng)標(biāo)本,包括似蚓蛔線蟲(chóng)、蟯蟲(chóng)、鞭蟲(chóng)、十二指腸鉤口線蟲(chóng)、華支睪吸蟲(chóng)、布氏姜片蟲(chóng)、日本血蟲(chóng)、豬帶絳蟲(chóng)、牛帶絳蟲(chóng)、曼氏迭宮絳蟲(chóng),均由本實(shí)驗(yàn)室保存。
6w齡健康雄性昆明小鼠(SPF級(jí)),體重20g~25g,購(gòu)買并飼養(yǎng)于軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。旋毛蟲(chóng)及其他樣本基因組DNA的提取采用天根公司的血液/組織/糞便基因組DNA提取試劑盒。
參考文獻(xiàn)
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[4]Rapid genotyping of carcinogenic human papillomavirus by loop-mediated isothermal amplification using a new automated DNA test(Clinichip HPV?)[J].Toyomi Satoh,Koji Matsumoto,Takuma Fujii,Osamu Sato,Nobuhiro Gemma,Mamiko Onuki,Hiroshi Saito,Daisuke Aoki,Yasuo Hirai,Hiroyuki Yoshikawa.Journal of Virological Methods.2012
[5]李雪蓮.環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）技術(shù)檢測(cè)旋毛蟲(chóng)DNA的研究[D].鄭州大學(xué),2016.