背景[1-3]
DNA純化試劑盒(DNA Purification Kit)是一種用于PCR產(chǎn)物純化或從多種DNA反應(yīng)體系中純化DNA的試劑盒。
DNA純化試劑盒也采用獨(dú)特的離心吸附柱純化酶切、PCR等反應(yīng)液中的DNA片段，同時(shí)除去蛋白質(zhì)、其他有機(jī)化合物、無(wú)機(jī)鹽離子及寡核苷酸引物等雜質(zhì)。使用DNA產(chǎn)物純化試劑盒可回收100bp-40kb大小的DNA片段，回收率可達(dá)80%以上（小于100bp和大于10kb的DNA片段回收率為30-50%）。
使用DNA產(chǎn)物純化試劑盒回收的DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、測(cè)序、文庫(kù)篩選、連接和轉(zhuǎn)化等試驗(yàn)。
適用于PCR反應(yīng)后去除引物、酶、礦物油、甘油、鹽等雜質(zhì)；也同樣適用于酶切、連接、磷酸化、補(bǔ)平或切平、隨機(jī)引物等反應(yīng)后的DNA純化。純化所得DNA可直接用于酶切、連接、轉(zhuǎn)化細(xì)菌、測(cè)序、PCR、雜交等后續(xù)操作。本試劑盒適用于純化100bp-10kb DNA，長(zhǎng)至30個(gè)堿基的引物均可被完全去除。
試劑盒采用了一種新型的DNA純化柱。在特定條件下，使DNA能在離心過(guò)柱的瞬間，結(jié)合到DNA純化柱上，在一定條件下又能將DNA充分洗脫，從而實(shí)現(xiàn)DNA的快速純化。無(wú)需酚氯仿抽提，無(wú)需酒精沉淀，12個(gè)樣品只需不足15分鐘即可完成。
每個(gè)DNA純化柱可以結(jié)合的DNA量的上限約為15微克。DNA回收效率約為90%。接近100bp或10kb的DNA片段回收效率要略低一些，大于10kb的DNA回收效率迅速下降。另外如果樣品中DNA含量特別低也會(huì)導(dǎo)致回收效率下降。
應(yīng)用[4][5]
用于接觸DNA檢材提取純化方法的比較及法醫(yī)學(xué)應(yīng)用研究
采用Quantifiler人類(lèi)DNA定量試劑盒(AB,USA)實(shí)時(shí)定量技術(shù)對(duì)目前常用的提取純化方法包括Chelex法、磁珠提取法(DNA IQ磁珠法、EQ國(guó)產(chǎn)磁珠法)、有機(jī)溶劑提取法、Microcon過(guò)柱法提取的接觸DNA進(jìn)行定量,同時(shí)用Identifiler或Sinofiler復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)(AB,USA)擴(kuò)增,在AB 3130遺傳分析儀上進(jìn)行STR(short tandem repeat,短串聯(lián)重復(fù))分型。
綜合DNA定量和STR分型結(jié)果,對(duì)各種提取純化方法獲得的DNA的質(zhì)和量進(jìn)行評(píng)估和系統(tǒng)比較,以建立有效的接觸DNA提取純化方法。
Chelex法提取接觸DNA的實(shí)時(shí)定量研究對(duì)使用后放置1個(gè)月以內(nèi)的30個(gè)飲料瓶口或吸管、30個(gè)礦泉水瓶(杯)口分別采用不洗滌直接加Chelex-100提取與洗滌+Chelex-100的方法提取DNA,通過(guò)PCR定量和STR檢測(cè),比較2種處理方式獲得的DNA平均含量、IPC Ct值、STR檢驗(yàn)成功率；
對(duì)使用后放置1個(gè)月以內(nèi)的10個(gè)新鮮飲料瓶口或吸管,使用后分別放置1個(gè)月和放置2個(gè)月的20把牙刷、20枚煙蒂,分別采用洗滌+Chelex-100和洗滌+Chelex-100+蛋白酶K(PK)的方法提取DNA,通過(guò)PCR定量和STR檢測(cè),比較2種處理方式獲得的DNA平均含量、IPC Ct值、STR檢驗(yàn)成功率。
研究結(jié)果表明,Chelex-100提取前加浸泡洗滌的步驟,可去除部分可溶性雜質(zhì),有利于提高獲得的DNA量和STR檢驗(yàn)成功率,同時(shí)降低反映PCR抑制物存在的IPC Ct值。
室溫放置1個(gè)月左右的新鮮接觸DNA檢材用Chelex法提取時(shí),是否加蛋白酶K對(duì)提取的DNA量和STR檢驗(yàn)成功率無(wú)顯著影響；室溫放置2個(gè)月以上的接觸DNA檢材用Chelex法提取時(shí),加蛋白酶K消化后獲得的DNA量和STR檢驗(yàn)成功率均高于不加蛋白酶K的樣品,差異有顯著性意義。
參考文獻(xiàn)
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