背景[1-3]
抗體標記是通過不同的化學試劑交聯(lián)到酶（辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、β-半乳糖苷酶）、熒光染料（FITC、PE、APC等）、生物素（Biotin）、膠體金等。
酶標記物包括酶標記抗原、酶標記抗體和酶標記SPA等。酶標記物質(zhì)量的好壞直接關(guān)系到免疫酶技術(shù)的成功與否，因此被稱為關(guān)鍵的試劑。酶標記物中最常用的是酶標記抗體，它是將酶與特異性抗體經(jīng)適當方法連接而成。
酶標記抗體的質(zhì)量主要取決于純度好、活性強及親和力高的酶和抗體，其次要有良好的制備方法。高質(zhì)量的酶(如辣根過氧化物酶，簡稱HRP)國內(nèi)已有商品供應。高質(zhì)量的抗體則可通過提取純化而獲得。在制備方法上，宜選用產(chǎn)率高、不影響結(jié)合物的活性和不混雜干擾性物質(zhì)且操作簡便易行的方法。
抗體經(jīng)過酶標記、鐵蛋白標記或通過膠體金標記獲得標記抗體，是免疫電鏡樣品制備的一種方法，用于觀察抗原抗體免疫復合物方面研究的手段。免疫標記技術(shù)是將一些既易測定又具有高度敏感性的物質(zhì)標記到特異性抗原或抗體分子上，通過這些標記物的增強放大效應來顯示反應系統(tǒng)中抗原或抗體的性質(zhì)與含量。
抗體標記主要是用于抗原的定位分析，在某些情況下，也可以對混雜有大量其他分子的樣本中的抗原進行定量檢測。由于抗體與其相應抗原具有很高的親和力，因此帶有易識別標記物的抗體可以定位分析抗原，并且是一種理想的快速價廉的定量測定方法。
應用[4][5]
用于抗體的磁性微球制備和膠體金標記技術(shù)的應用研究
用牛乳源蛋白β-CN免疫大白兔制備得到抗血清，經(jīng)鹽析和層析純化后得到兔抗β-CN IgG；對反相懸浮乳液包埋法制備磁性微球的條件進行了優(yōu)化，對制備得到的微球進行醛基化和嗜硫修飾，并同未修飾微球一起進行了抗體吸附和抗原富集的性能比較，確定修飾方法。
用檸檬酸三鈉還原法制備膠體金，標記鹽析IgG后用于金標墊的包被，檢測墊經(jīng)層析IgG和二抗包被后組裝各部件得到β-CN膠體金免疫層析試紙條，對其靈敏性、特異性及穩(wěn)定性進行測試，并用其對三種免疫磁性微球的抗原富集液進行定性檢測。特異性多克隆抗體的制備。選取牛乳源蛋白β-CN做為抗原免疫大白兔，頸動脈取血后得到的抗血清用飽和硫酸銨分級鹽析法（50%、40%、33%）粗分離抗體，用蛋白A親和色譜柱對粗分離的抗體進行層析純化。
考馬斯亮藍法測定鹽析和層析樣品的蛋白含量分別為2.42μg/ml和1.06μg/ml，其中層析樣品經(jīng)SDS-PAGE檢測分析得抗體純度達到95%以上，用間接ELISA法測定兩者效價均為1:8000。殼聚糖/明膠磁性微球的制備。
采用反相懸浮乳液包埋法制備磁性微球并進行優(yōu)化試驗，確定方案為：水相為3%殼聚糖-2%明膠-1%磁性粒子；油相液體石蠟/乳化劑span-80為1:0.03；水油比為1:4;乳化時間8-10min；轉(zhuǎn)速575r/min；固化交聯(lián)劑25%戊二醛加入量為0.5ml/5ml水相樣品；磁性微球洗滌順序為石油醚、丙酮：水3:1、異丙醇。得到的磁性微球經(jīng)SEM拍照觀察粒徑在3-8μm范圍內(nèi)，磁響應性良好。
參考文獻
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[5]李韻.抗體的磁性微球制備和膠體金標記技術(shù)的應用研究[D].陜西科技大學,2013.