背景[1-3]
脂肪酰輔酶A還原酶2抗體是可以特異性結合脂肪酰輔酶A還原酶21的一類多克隆抗體，主要用于檢測脂肪酰輔酶A還原酶2的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多種免疫學實驗。
檢測原理：雙抗體夾心法測定標本中脂肪酰輔酶A還原酶2水平。用純化的脂肪酰輔酶A還原酶2抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入脂肪酰輔酶A還原酶2，再與HRP標記的脂肪酰輔酶A還原酶2抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的脂肪酰輔酶A還原酶2呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中脂肪酰輔酶A還原酶2濃度。
脂肪?；o酶A還原酶2屬于脂肪酰基輔酶A還原酶家族。主要表達在眼瞼的瞼板腺和皮膚的皮脂腺。大腦中也有表達并合成了大量的醚脂。其生物學功能包括脂質代謝過程，長鏈脂肪?；o酶A代謝過程以及蠟酯生物合成過程等。脂肪?；o酶A還原酶2參與蠟酯生物合成的步的還原酶蛋白編碼，利用C16或C18飽和脂肪酸作為底物，將脂肪酸轉化為脂肪醇。
應用[4][5]
用于白蠟蟲脂酰輔酶A還原酶基因（EpFAR）的克隆表達與功能研究
白蠟蟲（Ericerus pela Chavanness）是我國特有的一種資源昆蟲,由于它能分泌性質優(yōu)異的蟲白蠟,在中國已經(jīng)被人工養(yǎng)殖上千年,蟲蠟主要用于蠟染、蠟燭、刻板模印、中藥等行業(yè)。
蟲白蠟是以高級飽和一元酸和高級飽和一元醇所構成的酯類為主要成分。酰基還原途徑是生物體內蠟酯合成的主要途徑之一,即脂酰輔酶A（fatty acyl-CoA）在脂酰輔酶A還原酶（fatty acyl-CoAreductase,FAR）的作用下還原生成脂肪醇,脂肪醇和脂酰輔酶A在蠟酯合酶（wax synthase,WS）的作用下生成酯。前期研究表明白蠟蟲fatty acyl-CoA reductase（EpFAR）基因是與泌蠟密切相關的基因之一。
采用分子生物學的相關技術方法,首先克隆獲得白蠟蟲EpFAR基因,明確了白蠟蟲EpFAR基因的序列特征,分析該基因在蟲體內各組織的轉錄水平和編碼蛋白的表達譜,進一步在培養(yǎng)的昆蟲細胞中表達EpFAR蛋白,通過檢測EpFAR酶的生物反應產(chǎn)物明確基因EpFAR的功能。
獲得的主要結果如下:1白蠟蟲EpFAR序列特征與系統(tǒng)發(fā)育本文在課題組前期研究得到的轉錄組數(shù)據(jù)分析基礎上,選擇其中的脂酰輔酶A還原酶基因序列片段,采用RACE擴增技術,克隆得到了EpFAR基因的3’端和5’端序列,經(jīng)DNAMAN軟件拼接后,上傳至NCBI在線比對,與其他生物的脂肪酰輔酶A還原酶基因同源,證明所得的基因為白蠟蟲的脂肪酰輔酶A還原酶基因,獲得了該基因全長cDNA,命名為EpFAR。
基因EpFAR開放閱讀框長1569 bp,共編碼522個氨基酸,分子量為60.3kDa,該基因具有典型的FAR基因的特征,屬于SDR superfamily成員,屬于NADBRossmann superfamily成員,FARC superfamily成員。
在其氮端具有特異的FAR-NSDRe結構域（22-353aa）,NADbinding4結構（26-297 aa）,以及Extended SDRs所有的典型的輔因子結合基序TGXXGXXG（24-34aa）,Classical SDRs所具有的活性位點基序YXXXK（216-220aa）,在其碳端具有特異的FARC結構域（387-477）,Sterile結構（388-479aa）。
該基因所具有的保守結構域表明該基因序列較為復雜,可能參與復雜的代謝途徑,發(fā)揮不同的分子功能。
參考文獻
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[3]Within-population variability in a moth sex pheromone blend:genetic basis and behavioural consequences[J].Astrid T.Groot,Gerhard Sch?fl,Ollie Inglis,Susanne Donnerhacke,Alice Classen,Antje Schmalz,Richard G.Santangelo,Jennifer Emerson,Fred Gould,Coby Schal,David G.Heckel.Proceedings of the Royal Society B:Biological Sciences.2014(1779)
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[5]胡艷紅.白蠟蟲脂酰輔酶A還原酶基因（EpFAR）的克隆表達與功能研究[D].南京林業(yè)大學,2018.