以石蠟油(培養(yǎng)油)覆蓋培養(yǎng)液用于人類受精卵和胚胎的體外培養(yǎng)已經(jīng)行之有年, 該項(xiàng)技術(shù)可有效避免在體外培養(yǎng)過(guò)程中培養(yǎng)液的蒸發(fā)損失，且覆蓋的石蠟油使得培養(yǎng)液和外部環(huán)境相互隔離, 有效避免溫度和pH值等在輔助生殖技術(shù)操作時(shí)產(chǎn)生波動(dòng), 保持培養(yǎng)液內(nèi)環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定和防止污染。

然而移植前胚胎對(duì)其發(fā)育環(huán)境極為敏感，因此與培養(yǎng)液直接接觸的石蠟油也會(huì)對(duì)胚胎發(fā)育產(chǎn)生影響(石蠟油的水溶性成分可擴(kuò)散到培養(yǎng)液中)，國(guó)內(nèi)研究人員為此開展了動(dòng)物試驗(yàn)，選取了三家廠商的四種石蠟油、觀察其對(duì)水牛孤雌胚胎體外培育的影響，結(jié)果顯示四種石蠟油對(duì)胚胎體外培育存在不同程度的影響，其中C公司石蠟油(過(guò)濾)對(duì)胚胎培育的效果。

四種石蠟油對(duì)水牛孤雌胚胎體外培育的影響

該試驗(yàn)結(jié)果與早年海外的研究結(jié)果相類似，當(dāng)時(shí)國(guó)外的研究人員比較了未經(jīng)洗滌和經(jīng)洗滌后的兩種石蠟油對(duì)微滴培養(yǎng)系統(tǒng)中鼠胚發(fā)育的影響，結(jié)果也顯示經(jīng)洗滌后的石蠟油組的鼠胚發(fā)育更優(yōu)。

進(jìn)一步分析天然石蠟油所含成分，我們發(fā)現(xiàn)其中含有胚胎毒性物質(zhì)，這些物質(zhì)具有親水特性、易于擴(kuò)散進(jìn)入培養(yǎng)液中，而石蠟油的密度、黏性也會(huì)影響胚胎毒性物質(zhì)擴(kuò)散進(jìn)入培養(yǎng)液中的速率和量，最后由于胚胎體外培養(yǎng)往往采用微滴模式、培養(yǎng)液的用量較少而石蠟油覆蓋后的接觸面積相對(duì)較大、使得石蠟油中的胚胎毒性物質(zhì)更易于擴(kuò)散進(jìn)入培養(yǎng)液。

因此須對(duì)石蠟油進(jìn)行洗滌和過(guò)濾，去除其中的有害成分，才能安全地使用于人類輔助生殖技術(shù)中，其品質(zhì)需經(jīng)過(guò)鼠胚試驗(yàn)和人精子存活試驗(yàn)的驗(yàn)證。
人精子存活試驗(yàn)。該試驗(yàn)采用優(yōu)化處理后活力保持在90%以上的人類精子，根據(jù)待測(cè)石蠟油的功能和特性，在相應(yīng)培養(yǎng)環(huán)節(jié)使用待測(cè)石蠟油后，經(jīng)37度培養(yǎng)24 小時(shí)后與對(duì)照石蠟油組比較，觀察待測(cè)組的精子活力是否顯著下降，從而評(píng)價(jià)待測(cè)石蠟油的品質(zhì)和潛在毒性。

試驗(yàn)用儀器

精子計(jì)數(shù)板、恒溫臺(tái)、光學(xué)顯微鏡、計(jì)數(shù)器、計(jì)時(shí)器、溫度計(jì)、水平式離心機(jī)、超凈工作臺(tái)、二氧化碳培養(yǎng)箱等。
重要評(píng)價(jià)指標(biāo)

01. 精子活力，以前向運(yùn)動(dòng)精子所占全部精子的百分率表示(前向運(yùn)動(dòng)是指精子主動(dòng)地呈線性或沿一大圓周運(yùn)動(dòng)，不考慮速度)；

02. 精子活力系數(shù)，經(jīng)過(guò)一定培養(yǎng)時(shí)間后的精子活力與培養(yǎng)開始時(shí)精子活力的比值，反映精子活力的變化情況；

03. 相對(duì)精子活力系數(shù)，相同培養(yǎng)時(shí)間，試驗(yàn)組精子活力系數(shù)與對(duì)照組精子活力系數(shù)的比值，反映試驗(yàn)組對(duì)精子活力的影響程度。