背景[1-3]
人芳基硫酸酯酶A(ASA)ELISA KIT用純化的人芳基硫酸酯酶A(ASA)抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗該指標抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗人芳基硫酸酯酶A(ASA)指標抗體、HRP標記的親和素，經(jīng)過徹底洗滌后用底物TMB顯色。
TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。人芳基硫酸酯酶A(ASA)是催化苯酚硫酸酯水解成苯酚和硫酸的酶。有A、B、C三種類型。芳基硫酸酯酶A（ARSA）是一種溶酶體酶，可將腦磷脂3硫酸鹽（髓磷脂片的主要成分）分解為腦苷脂和硫酸鹽。ARSA缺乏會導致異色性白細胞營養(yǎng)不良（MLD），這是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)的溶酶體貯積病，具有嚴重和進行性神經(jīng)癥狀。重組人ARSA對應于ARSA成熟肽，并具有硫酸酯酶活性。缺少芳基硫酸酯酶是導致異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良的原因之一。
應用[4][5]
人芳基硫酸酯酶A(ASA)ELISA KIT用于產(chǎn)芳基硫酸酯酶菌株的篩選及酶學性質(zhì)研究。
芳基硫酸酯酶(Arylsulfatase)是一種催化裂解硫酸酯鍵，生成相應的醇和無機硫酸根的酶，該酶可以脫除瓊膠分子中的硫酸根，進而可以替代對環(huán)境污染嚴重、產(chǎn)品得率低的化學方法，用于制備高品質(zhì)的瓊脂糖。菌株經(jīng)革蘭氏染色為陰性，需氧，彎桿狀，生理生化特征驗證及16S rDNA序列分析確定為海單胞菌屬，并將其命名為Marinomonas sp.FW-1，簡稱FW-1。證實了菌株FW-1的產(chǎn)酶能力后，選取常用的pNPS法對其產(chǎn)酶能力進行定量分析。采用單因素-響應面方法對菌株FW-1產(chǎn)芳基硫酸酯酶的培養(yǎng)條件及培養(yǎng)基成分進行優(yōu)化。結果表明，其培養(yǎng)基組分為(w/v)：瓊脂0.2%，酵母膏0.2%，蛋白胨0.5%，NaCl2.89%，MgCl2·6H200.412%，KCl0.1%，CaCl20.02%，K2HPO4·3H200.013%，F(xiàn)eCl2·4H2O0.002%，MnCl20.09%，焦磷酸鈉0.043%，吐溫-801.87%；培養(yǎng)條件如下：初始pH為7，培養(yǎng)溫度為35℃，發(fā)酵時間為72h，接種量為1%，250mL錐形瓶裝液量為50mL。在上述培養(yǎng)基成分及培養(yǎng)條件下，菌株FW-1的產(chǎn)酶能力為1.07U/mL，酶活力相對于優(yōu)化前提高了4.28倍。
菌株FW-1能夠穩(wěn)定地產(chǎn)生芳基硫酸酯酶，該酶主要位于菌體細胞內(nèi)部,在最適培養(yǎng)條件下發(fā)酵培養(yǎng)72h后，發(fā)酵液經(jīng)低溫離心、超聲波細胞破碎、硫酸銨分級沉淀、透析除鹽、超濾濃縮、非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳原位檢測及分離后得到粗酶液。純度鑒定及分子量測定表明該酶的分子量約為60kDa。酶學性質(zhì)實驗表明，芳基硫酸酯酶的最適反應溫度和pH分別是45℃和11。該酶在4℃以下保存時較為穩(wěn)定，在4℃放置72h后，酶活仍保留在95%以上，酶的熱穩(wěn)定良好，25℃保溫48h后，酶活剩余90%左右，但當溫度大于35℃時，6h以后酶活就開始急劇下降。該酶在pH為7.0~11.0時具有良好的穩(wěn)定性。當金屬離子濃度為0.1mM/L時，K+、Ba2+和Ca2+對芳基硫酸酯酶酶活力具有顯著的促進作用，Hg2+能夠抑制芳基硫酸酯酶酶活力，酶活下降了59%；當離子濃度為1mM/L時，Ba2+、Fe3+、Fe2+、Mg2+及Ca2+對芳基硫酸酯酶酶活力具有顯著的促進作用，Hg2+同樣能夠有效地抑制芳基硫酸酯酶酶活力，酶活大幅度下降了80%。利用純化后的芳基硫酸酯酶對瓊膠進行酶解實驗，結果表明該酶可以有效地脫除瓊膠中的硫酸根，對石花菜和江蘺瓊膠的硫酸根脫除率分別為86.11%和89.61%。
參考文獻
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[5]王志朋.產(chǎn)芳基硫酸酯酶菌株的篩選及酶學性質(zhì)研究[D].中國海洋大學,2014.