背景^[1-3]

人3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A合酶1(HMGCS1)ELISA KIT采用定量夾心酶免疫測定技術(shù)。免疫酶技術(shù)(immunoenzymatic technique)也叫酶免疫測定，是通過酶標(biāo)記抗體或抗原來檢測抗原或抗體的方法，其應(yīng)用范圍極廣。顯示方法是用酶的特殊底物來處理反應(yīng)后的標(biāo)本，通過酶催化底物的顯色反應(yīng)來測定抗原或抗體的存在，以酶標(biāo)作定量或定性分析。標(biāo)記酶有辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶等，它們與抗原或抗體結(jié)合后活性不受影響。底物一般是鄰苯二胺和對硝基苯磷酸酯。它具有敏感性高、特異性強，既可定性又可定量的特點。免疫酶技術(shù)是將抗原抗體反應(yīng)的特異性與酶的高效催化作用有機結(jié)合的一種方法。它以酶作為標(biāo)記物，與抗體或抗原聯(lián)結(jié)，與相應(yīng)的抗原或抗體作用后，通過底物的顏色反應(yīng)作抗原抗體的定性和定量，亦可用于組織中抗原或抗體的定位研究，即酶免疫組織化學(xué)技術(shù)。

目前應(yīng)用最多的免疫酶技術(shù)是酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA），它是使抗原或抗體吸附于固相載體，使隨后進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)均在載體表面進(jìn)行，從而簡化了分離步驟，提高了靈敏度，即可檢測抗原，也可檢測抗體。實驗方法包括間接法、夾心法及競爭法。HMGCS1特異的抗體已預(yù)先包被在微孔板上。將標(biāo)準(zhǔn)品和樣品吸取到孔中，并且存在的任何HMGCS1都與固定的抗體結(jié)合。除去任何未結(jié)合的物質(zhì)后，將對HMGCS1特異的生物素偶聯(lián)抗體添加到孔中。洗滌后，將抗生物素蛋白綴合的辣根過氧化物酶（HRP）加入孔中。洗滌以除去任何未結(jié)合的抗生物素蛋白-酶試劑后，將底物溶液添加至孔中，并且顏色與初始步驟中結(jié)合的HMGCS1的數(shù)量成比例。

應(yīng)用^[4][5]

用于胰島素、格列本脲和二甲雙胍對妊娠期糖尿病小鼠分別干預(yù)改善子代糖脂代謝研究

應(yīng)用GDM小鼠模型,研究孕期進(jìn)行胰島素,二甲雙胍和格列本脲干預(yù)對子代的葡萄糖和脂質(zhì)代謝的影響。方法:實驗前動物自由進(jìn)食標(biāo)準(zhǔn)飼料,維持12 h光照和12 h黑暗的晝夜節(jié)律。實驗室溫度:23±2℃,濕度:50±5%,自由飲水。在上述環(huán)境適應(yīng)1 w后,受試動物按2:1雌雄合籠,次日早晨7:00檢查陰栓,查到陰栓定為交配成功,并定為GD0。在GD6,GD7,GD8連續(xù)3天腹腔內(nèi)注射低劑量鏈脲佐菌素(STZ)40mg/kg誘導(dǎo)C57BL/6J小鼠成為GDM母鼠。尾靜脈采血測血糖,72 h內(nèi)空腹血糖≥11.1 mmol/L即為成功模型,正常對照組孕鼠腹腔注射等量生理鹽水。懷孕母鼠隨機分成4組(10只/組):妊娠糖尿病組(G組),妊娠糖尿病胰島素干預(yù)組(GI組),妊娠糖尿病格列苯脲干預(yù)組(GG組),妊娠糖尿病二甲雙胍干預(yù)組(GM組)。三個藥物干預(yù)組從確診為GDM母鼠那天起,每天接受單一種類藥物治療直至分娩。子代分別在第4周和第8周進(jìn)行胰島素耐量實驗(ITT),葡萄糖耐量實驗(GTT)。使用ELISA試劑盒分析子代小鼠血漿胰島素含量。通過酶試劑盒分別測定子代小鼠血清和肝臟中的總膽固醇(TC),甘油三酯(TG)的水平。進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡實驗檢測子代小鼠肝臟中的胰島素信號通路,葡萄糖和脂質(zhì)代謝相關(guān)蛋白。結(jié)果:妊娠期間GDM母鼠通過胰島素、格列本脲和二甲雙胍分別干預(yù)能改善雄性子代小鼠血脂異常,肝臟脂質(zhì)異常和胰島素敏感性異常的情況,直至它們8周齡。具體而言,胰島素,格列本脲和二甲雙胍對GDM母鼠妊娠期的干預(yù)可改善4至8周齡雄性子代血漿TC,TG,LDL-C水平升高(P<0.05),肝臟脂質(zhì)含量增加,可降低糖異生關(guān)鍵酶:葡萄糖-6-磷酸激酶(G6Pase),磷酸烯醇式丙酮酸激酶(PEPCK),三羥基三甲基輔酶A合成酶1(HMGCS1)水平(P<0.05),并顯著改善蛋白激酶B(AKT)肝磷酸化水平降低,肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶1(CPT1A)水平降低的情況(P<0.05)。

參考文獻(xiàn)

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