背景及概述^[1]

Hoechst 33342，也稱bisBenzimide H 33342或HOE 33342，是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，對(duì)細(xì)胞的毒性較低。Hoechst 33342染色常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。Hoechst 33342也常用于普通的細(xì)胞核染色，或常規(guī)的DNA染色。Hoechst 33342的激發(fā)波長(zhǎng)為346nm，發(fā)射波長(zhǎng)為460nm；Hoechst 33342和雙鏈DNA結(jié)合后，激發(fā)波長(zhǎng)為350nm，發(fā)射波長(zhǎng)為461nm。本Hoechst 33342染色液為即用型，可直接用于固定細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色，也可直接用于活細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色。

使用說明^[1]

1. 對(duì)于固定的細(xì)胞或組織：

a. 對(duì)于細(xì)胞或組織樣品，固定后，適當(dāng)洗滌去除固定劑。隨后如果需要進(jìn)行免疫熒光染色，則先進(jìn)行免疫熒光染色，染色完畢后再按后續(xù)步驟進(jìn)行Hoechst 33342染色。如果不需要進(jìn)行其它染色，則直接進(jìn)行后續(xù)的Hoechst 33342染色。

b. 對(duì)于貼壁細(xì)胞或組織切片，加入少量Hoechst 33342染色液，覆蓋住樣品即可；對(duì)于懸浮細(xì)胞，至少加入待染色樣品3倍體積的染色液，混勻。室溫放置3-5分鐘。

c. 吸除Hoechst 33342染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鐘。

d. 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，會(huì)看到凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀致密濃染。

2. 對(duì)于活細(xì)胞或組織：

a. 加入適當(dāng)量Hoechst 33342染色液，必須充分覆蓋住待染色的樣品，通常對(duì)于六孔板一個(gè)孔需加入1ml染色液，對(duì)于96孔板一個(gè)孔需加入100微升染色液。

b. 在適宜于細(xì)胞培養(yǎng)的溫度下培養(yǎng)20-30分鐘。棄染色液，用PBS或培養(yǎng)液洗滌2-3次即可進(jìn)行熒光檢測(cè)。

注意事項(xiàng)^[1]

熒光染料都存在淬滅的問題，為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光衰減封片劑。建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè)，活細(xì)胞或組織染色后應(yīng)立即觀察。Hoechst 33342對(duì)人體有害，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

主要參考資料

[1] Hoechst 33342 染色液（10ug/mL 即用型）使用說明