概述^[1][2]

本試劑盒適用于從糞便樣本中提取總DNA，包括細(xì)胞、細(xì)菌、寄生蟲以及病毒DNA，也適用于含有高濃度PCR反應(yīng)抑制劑的樣本。本品可處理多至300 mg的糞便樣本，純化獲得主要為20-30 kb的DNA片段，純化過程中不需苯酚或氯仿等有毒溶劑，無需乙醇沉淀，可在一小時(shí)內(nèi)獲得高純度的DNA。本試劑盒采用獨(dú)特的緩沖系統(tǒng)使裂解液中的DNA高效結(jié)合到吸附柱上，同時(shí)糞便中的蛋白雜質(zhì)及抑制下游反應(yīng)的其他有機(jī)化合物可流過膜，PCR和酶反應(yīng)的抑制劑以及殘留的雜質(zhì)可通過兩步洗滌步驟有效去除，最后使用低鹽緩沖液或水洗脫，即可獲得高純度DNA。純化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文庫構(gòu)建、Southern Blot、分子標(biāo)記等下游實(shí)驗(yàn)。

試劑盒組成^[1]

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備及重要注意事項(xiàng)^[2]

1、樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的DNA 片段較小且提取量下降。

2、次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明預(yù)先在Buffer GW1和GW2中加入無水乙醇。

3、使用前請(qǐng)檢查Buffer SL和Buffer GL是否出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀，如有結(jié)晶或者沉淀，請(qǐng)將Buffer SL和Buffer GL于56℃水浴重新溶解。

4、如果下游實(shí)驗(yàn)對(duì)RNA污染比較敏感，可以在加入Buffer SL后加入4μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml)， RNase A本試劑盒并未提供。

注意：

1)如果下游實(shí)驗(yàn)對(duì)pH值或EDTA敏感，可以用滅菌水洗脫。洗脫液的pH值對(duì)洗脫效率有很大影響，若用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH將水的pH值調(diào)到此范圍)，pH值低于7.0時(shí)會(huì)降低洗脫效率。

2)離心之前室溫孵育5分鐘可以增加產(chǎn)量。

3)用另外的50-100μl Buffer GE或滅菌水再次洗脫可以增加產(chǎn)量。

4)如果要提高DNA的終濃度，可以將步驟11所得的DNA洗脫液重新加至吸附膜上，重復(fù)步驟11；可以增加DNA的終濃度，但可能會(huì)減少總產(chǎn)量。如果DNA的量小于1μg，推薦用50μl Buffer GE或滅菌水洗脫。

5)保存在水中的DNA會(huì)受到酸性水解作用的影響，如需長期保存，推薦用Buffer GE洗脫并于-20℃保存。

6)基因組DNA模板中殘余的微量PCR抑制物可能對(duì)PCR反應(yīng)產(chǎn)生不良影響，可將DNA稀釋2-10倍通常即可解決。

儲(chǔ)存條件：室溫(15～30℃)。

主要參考資料

[1] 糞便基因組DNA提取試劑盒產(chǎn)品說明書