概述^[1][2]

本試劑盒適用于從糞便樣本中提取總DNA，包括細胞、細菌、寄生蟲以及病毒DNA，也適用于含有高濃度PCR反應抑制劑的樣本。本品可處理多至300 mg的糞便樣本，純化獲得主要為20-30 kb的DNA片段，純化過程中不需苯酚或氯仿等有毒溶劑，無需乙醇沉淀，可在一小時內(nèi)獲得高純度的DNA。本試劑盒采用獨特的緩沖系統(tǒng)使裂解液中的DNA高效結(jié)合到吸附柱上，同時糞便中的蛋白雜質(zhì)及抑制下游反應的其他有機化合物可流過膜，PCR和酶反應的抑制劑以及殘留的雜質(zhì)可通過兩步洗滌步驟有效去除，最后使用低鹽緩沖液或水洗脫，即可獲得高純度DNA。純化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文庫構(gòu)建、Southern Blot、分子標記等下游實驗。

試劑盒組成^[1]

實驗前準備及重要注意事項^[2]

1、樣品應避免反復凍融，否則會導致提取的DNA 片段較小且提取量下降。

2、次使用前應按照試劑瓶標簽的說明預先在Buffer GW1和GW2中加入無水乙醇。

3、使用前請檢查Buffer SL和Buffer GL是否出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀，如有結(jié)晶或者沉淀，請將Buffer SL和Buffer GL于56℃水浴重新溶解。

4、如果下游實驗對RNA污染比較敏感，可以在加入Buffer SL后加入4μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml)， RNase A本試劑盒并未提供。

注意：

1)如果下游實驗對pH值或EDTA敏感，可以用滅菌水洗脫。洗脫液的pH值對洗脫效率有很大影響，若用水做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH將水的pH值調(diào)到此范圍)，pH值低于7.0時會降低洗脫效率。

2)離心之前室溫孵育5分鐘可以增加產(chǎn)量。

3)用另外的50-100μl Buffer GE或滅菌水再次洗脫可以增加產(chǎn)量。

4)如果要提高DNA的終濃度，可以將步驟11所得的DNA洗脫液重新加至吸附膜上，重復步驟11；可以增加DNA的終濃度，但可能會減少總產(chǎn)量。如果DNA的量小于1μg，推薦用50μl Buffer GE或滅菌水洗脫。

5)保存在水中的DNA會受到酸性水解作用的影響，如需長期保存，推薦用Buffer GE洗脫并于-20℃保存。

6)基因組DNA模板中殘余的微量PCR抑制物可能對PCR反應產(chǎn)生不良影響，可將DNA稀釋2-10倍通常即可解決。

儲存條件：室溫(15～30℃)。

主要參考資料

[1] 糞便基因組DNA提取試劑盒產(chǎn)品說明書