概述[1-2]
試劑盒是一種將測(cè)定一種成分所需要的2種或2種以上的試劑及實(shí)驗(yàn)室一般用品連同操作說(shuō)明書(shū)包裝在一起，形成商品化的試劑單位，即由廠家提供給用戶使用的一種套裝試劑，使用者除用自備的蒸餾水或試劑盒提供的緩沖液進(jìn)行復(fù)溶試劑的操作外不需要作任何試劑配制。目前檢測(cè)試劑已廣泛采用這一方式提供，kit的應(yīng)用不但節(jié)約人力減少配制誤差，而且有利于試劑質(zhì)量的保證和實(shí)驗(yàn)室間方法學(xué)的統(tǒng)一，提高了可比性。
病毒RNA快速提取試劑盒采用特異性結(jié)合病毒RNA的離心吸附柱和獨(dú)特的緩沖液系統(tǒng)，病毒RNA提取試劑盒適合于從無(wú)細(xì)胞體液，包括血漿、血清、腹水、培養(yǎng)細(xì)胞上清液、腦脊髓液及尿液等中快速提取高純的病毒RNA。該產(chǎn)品可以滿足絕大多數(shù)的病毒RNA的提取要求，如病毒RNA：HCV（丙肝病毒），HIV（艾滋病毒），和HTLV（人類(lèi)嗜T淋巴細(xì)胞病毒）；等等。病毒裂解后，RNA后在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜，再通過(guò)一系列快速的漂洗－離心的步驟，將鹽、細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除，最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈的病毒RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。純化后的病毒核酸無(wú)雜質(zhì)和PCR抑制劑，可直接適用于PCR/RT-PCR等分析。
產(chǎn)品特點(diǎn)[2]
1.不需要使用有毒的苯酚等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。
2.節(jié)省時(shí)間，簡(jiǎn)捷，單個(gè)樣品操作一般可在20分鐘內(nèi)完成。
3.多次柱漂洗確保高純度，提取的病毒RNA純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠，可適用于各種常規(guī)操作，包括PCR/RT-PCR等。
操作步驟[2]
次使用前請(qǐng)先在10ml漂洗液RW中加入40ml無(wú)水乙醇，充分混勻，加入后請(qǐng)及時(shí)在方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入。
1.200μl血清等體液（需回復(fù)到室溫，不足可用0.9%NaCl或者PBS補(bǔ)足）轉(zhuǎn)入上述1.5ml離心管，加入400μl裂解液RLB，立刻渦旋振蕩充分混勻。
2.室溫(15-25℃)放置10分鐘，每隔5分鐘，振蕩混勻一次。
3.加入450μl無(wú)水乙醇，立刻渦旋振蕩充分混勻。如果周?chē)h(huán)境高于25℃，乙醇需要冰上預(yù)冷后再加入。
4.將上述混合物加入一個(gè)吸附柱RA中，（吸附柱放入收集管中）13，000rpm離心30-60秒，倒掉收集管中的廢液。如果總體積超過(guò)750μl，可分兩次將溶液加入同一個(gè)吸附柱RA中。
5.加500μl去蛋白液RE，12，000rpm離心30秒，棄廢液。
6.加入500μl漂洗液RW（請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇!），12，000rpm離心30秒，棄廢液，加入500μl漂洗液RW，重復(fù)一遍。
7.將吸附柱RA放回空收集管中，13，000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
8.取出吸附柱RA，放入一個(gè)RNasefree的離心管中，在吸附膜的中間部位加30-50μlRNasefreeH20（事先在65－70℃水浴中加熱效果更好），室溫放置1分鐘，12，000rpm離心1分鐘。如果想得到較多量的RNA，可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，12，000rpm離心1分鐘。洗脫體積越大，洗脫效率越高。如果需要RNA濃度較高，可以適當(dāng)減少洗脫體積，但是最小體積不應(yīng)少于20μl，體積過(guò)小降低洗脫效率，減少RNA產(chǎn)量。
9.RNA病毒建議立刻使用，否則立刻短期放置在-70℃?zhèn)溆谩?/p>
制備[3]
病毒RNA快速提取試劑盒包括以下試劑：
1)紅細(xì)胞裂解液：含有碳酸氫鉀10mmol/L?12mmol/L，氯化銨135mmol/L?160mmol/L，PH值為8.0的乙二胺四乙酸溶液(EDTA)0.1mmol/L?1mmol/L；
2)白細(xì)胞裂解液：含有PH值為8.0的三羥甲基氨基甲烷溶液(Tris?HCl)5?20mmol/L，PH值為8.0的乙二胺四乙酸溶液(EDTA)50?150mmol/L，十二烷基硫酸(SDS)0.5?2％；
3)消化液：含十二烷基硫酸(SDS)1?5％；
4)純化液：含飽和氯化鈉溶液6mol/L；或含飽和醋酸鈉溶液5.0?6.0mol/L；
5)DNA保存液：為經(jīng)過(guò)滅菌處理的PH值為8.0?8.5的Tris?HCl溶液，或PH值在7.0?8.5范圍內(nèi)滅菌ddH2O.
主要參考資料
[1] 協(xié)和醫(yī)學(xué)詞典
[2] 病毒RNA快速提取試劑盒操作方法及步驟說(shuō)明書(shū)
[3] CN201110064203.3人類(lèi)全血中病毒基因組DNA提取試劑盒及方法