背景[1-3]
ATH III抗凝血酶3抗體是可以特異性結(jié)合ATH III抗凝血酶3的一類多克隆IgG。ATH III抗凝血酶3基因編碼的蛋白質(zhì)是血漿蛋白酶抑制劑,是絲氨酸蛋白酶抑制劑(serpin)超家族的成員。ATH III抗凝血酶3蛋白抑制凝血酶以及凝血系統(tǒng)的其他活化的絲氨酸蛋白酶,并調(diào)節(jié)血液凝血級聯(lián)反應(yīng)。該蛋白包括兩個(gè)功能域:成熟蛋白N端的肝素結(jié)合域和C端的反應(yīng)位域。肝素的存在增強(qiáng)了抑制活性。
已經(jīng)為該基因鑒定出120多種突變,其中許多已知會引起抗凝血酶III缺乏癥。ATH III抗凝血酶3是血漿中最重要的絲氨酸蛋白酶抑制劑,可調(diào)節(jié)凝血級聯(lián)反應(yīng)。AT-III抑制凝血酶,matriptase-3/TMPRSS7以及因子IXa,Xa和XIa。在肝素的存在下其抑制活性大大增強(qiáng)。ATH III抗凝血酶3抗體可以用于人抗凝血酶3(AT-III)抗體酶聯(lián)免疫分析應(yīng)用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中人抗凝血酶3(AT-III)抗體水平。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被單抗的微孔中依次加入抗凝血酶3(AT-III)抗體,再與HRP標(biāo)記的抗原結(jié)合,形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的抗凝血酶3(AT-III)抗體呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人抗凝血酶3(AT-III)抗體濃度。
應(yīng)用[4][5]
用于轉(zhuǎn)人AT-Ⅲ的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞抗異種移植凝血紊亂的研究
隨著α-1,3-半乳糖轉(zhuǎn)移酶(α-1,3-galactosyltransferase,α-1,3GT)基因敲除豬(GTKO)的問世,異種超急性排斥反應(yīng)(hyperacute rejection,HAR)已得到基本控制,但隨后發(fā)生的急性體液排斥反應(yīng)(Acute humoral xenograft rejection,AHXR)仍是造成異種移植物失活和受體死亡的主要原因。AHXR是一個(gè)多因素多途徑的免疫反應(yīng)過程,其主要的病理特征是血栓性微血管病或消耗性凝血病如彌漫性血管內(nèi)凝血(Disseminated Intravascular Coagulation,DIC)。目前研究表明供受體的凝血-抗凝血系統(tǒng)不相容所引發(fā)的受體凝血功能紊亂是造成異種移植凝血功能障礙發(fā)生的重要原因??鼓?3(Antithrombin-III,AT-III)在豬與靈長類動(dòng)物之間由于存在種屬差異,不能在人體內(nèi)發(fā)揮有效抗凝作用,致使移植器官血管內(nèi)廣泛產(chǎn)生血栓,最終導(dǎo)致移植失敗。
AT-III是血漿中最重要的抗凝物,其由肝臟及血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生,在肝素的協(xié)同作用下與FXa和凝血酶結(jié)合發(fā)揮抗凝血作用。本研究擬以豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenehymal stem cells,MSCs)為載體,利用慢病毒感染的方法,使豬MSCs表達(dá)人AT-III,并利用體外異種移植凝血模型對其抗凝效果進(jìn)行檢測,希望為解決異種肝移植術(shù)后受體凝血功能紊亂提供新方案和新思路。利用慢病毒感染技術(shù),將人抗凝血酶III(AT-III)的基因轉(zhuǎn)入GTKO豬源性的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中,使其表達(dá)并分泌人源性抗凝血酶III,從而減少異種移植中因供受體間凝血調(diào)節(jié)因子不相容引起的凝血紊亂。
參考文獻(xiàn)
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