背景及概述^[1][2]

鄰甲酚酞又稱為鄰甲苯酚酞(C22H18O4mol346.38)白色或黃色粉末，易溶于乙醇、乙醚；不溶于水，溶于稀堿呈藍色，pH值8.2-9.8（顏色由無色至紅色）；吸收峰566（381）mm。鄰甲酚酞絡(luò)合劑是金屬絡(luò)合指示劑,同時也是酸堿指示劑。在酸性溶液中與鈣及鎂螯合,生成紫紅色螯合物。

制備^[1]

一種鄰甲酚酞絡(luò)合劑的制備方法，步驟如下：

⑴將500g鄰苯二甲酸酐和600g鄰甲苯酚混合后，再攪拌下慢慢加熱使其溶解，放置，另取600g無水氯化鋅再攪拌下迅速加入上述混合物中，在105?110℃加熱5?6小時，然后加入1000ml水?dāng)嚢?，使其溶解，將其反?yīng)物倒入10L水和500ml濃鹽酸的溶液中，即析出固體沉淀，過濾。用水洗滌數(shù)次，將沉淀移入研缽中，研碎后，加500ml稀鹽酸（15%體積分數(shù)的鹽酸）和500ml水，再過濾，若產(chǎn)物不是固體，是油狀物，可加熱至沸，再冷至5℃，過濾得粗品；

⑵將粗品置于10L不銹鋼容器中，加入1500ml10%氫氧化鈉，攪拌或加熱使其溶解，加5000ml水冷卻后，用折疊濾紙過濾，用2000ml水洗滌，在濾液中加入鹽酸，使對石蕊試紙顯酸性，冷卻后，濾出結(jié)晶，用水洗滌，晾干干燥，得400?500g鄰甲酚酞絡(luò)合劑成品。

應(yīng)用^[2-3]

一、小鼠微量血清鈣的鄰甲酚酞絡(luò)合劑測定法

1儀器與試劑

儀器:SP-2102UV紫外可見分光光度計(上海光譜儀器有限公司)。

試劑:鄰甲酚酞絡(luò)合劑(OCPC)、8-羥喹啉(8-HQ)、二乙胺、甲醇、碳酸鈣、濃鹽酸。所用試劑均為分析純。

動物:昆明種小鼠,購于天津市公共衛(wèi)生監(jiān)督所實驗動物中心。

2試劑的配制

鈣標準液的配制:無水碳酸鈣于110°C干燥12h,精密稱取2.5g,置1000ml容量瓶中,加水100m1,滴加濃鹽酸5ml,溶解,加水至刻度,搖勻,溶液中鈣濃度為lmg/m1。鈣顯色劑的配制:量取OCPC試液(稱取OCPC32.5mg,8-HQ1.1g,加水250ml,加濃鹽酸7.5m1,充分攪拌溶解后用水補足500m1,混勻)、二乙胺試液(量取二乙胺2lml,加水至500ml,混勻)、甲醇按1.5∶1.5∶1.0的比例配成鈣顯色劑。臨用前配制。

3實驗方法

3.1小白鼠血鈣測定法

將小白鼠斷頭,使血液滴入1.5ml離心管中,每只約取血0.5～1ml,3000r/min離心l5～20min。取血清50μl,加鈣顯色劑4.0ml,搖勻,立即在570nm波長處測定吸收度。每次實驗同時取各種濃度的鈣標準液與血清樣品同條件操作做標準曲線,求得血鈣值。

3.2工作曲線繪制

分別吸取2.5、5.0、7.5、10.0、15.0ml鈣標準溶液加入到100m1容量瓶中,用去離子水稀釋至刻度搖勻,稀釋成25、50、75、100、150μg/m1不同濃度的鈣標準液。進行多次測定,繪制工作曲線,利用標準曲線法測定血清中鈣的含量。

二、一種基于鄰甲酚酞褪色法的γ-環(huán)糊精含量分光光度測定方法

采用以下實驗步驟：(1)測定溶液的準備；(2)樣品吸光值差測定：取0.21mmol/L鄰甲酚酞絡(luò)合劑溶液3mL加入50mL棕色比色管中，加入γ-CD溶液3mL，再以pH＝9.51碳酸鈉/碳酸氫鈉緩沖溶液定容至25mL，搖勻后于30℃恒溫水浴靜置15min，在576nm處以緩沖溶液為參比測定吸光度?？瞻讓嶒炛幸?mL蒸餾水替代γ-CD溶液，其余實驗操作相同。吸光度差值(ΔA)＝空白溶液吸光度(A′)-樣品吸光度(A)(3)標準曲線的繪制：在各管中分別加入1.5mmoL/L、3mmoL/L、4.5mmoL/L、6mmoL/L、7.5mmoL/L、9mmoL/L的γ-CD溶液，以上述方法測定各吸光值差，以環(huán)糊精濃度為橫坐標，吸光度差ΔA為縱坐標作圖，得到一正相關(guān)曲線，作為γ-CD標準曲線。

主要參考資料

[1][中國發(fā)明]CN201210440789.3鄰甲酚酞的制備方法

[2]王麗霞,劉安軍,王穩(wěn)航,趙淑靜.小鼠微量血清鈣的鄰甲酚酞絡(luò)合劑測定法[J].微量元素與健康研究,2004(04):45-46.

[3]CN201711265167.0一種基于鄰甲酚酞褪色法的γ-環(huán)糊精含量分光光度測定方法