概述^[1]

神經(jīng)干細(xì)胞程序凍存液是神經(jīng)干細(xì)胞的無血清細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基。 該產(chǎn)品僅用于實(shí)驗(yàn)室研究，不能用于臨床和家庭用途或其他用途。

質(zhì)量控制：

經(jīng)過了細(xì)菌、真菌、支原體檢測；

運(yùn)輸：

采用冰袋保存運(yùn)輸；

保存：

保存于2-8°C，有效期維持三年；

為了維持產(chǎn)品穩(wěn)定性，請勿反復(fù)凍融相關(guān)產(chǎn)品。

特點(diǎn)^[1]

即用型產(chǎn)品，方便快捷；

復(fù)蘇率更高達(dá) 90%，遠(yuǎn)超普通凍存液的70%的效率；

無需程序凍存，細(xì)胞可直接置于- 80°C冰箱，省事省時(shí)。

凍存步驟^[1] 

1．選擇處于對數(shù)生長期的細(xì)胞，按照常用的方法收集細(xì)胞于離心管中，按照培養(yǎng)細(xì) 胞密度和所用細(xì)胞凍存管的尺寸計(jì)算所需凍存細(xì)胞數(shù)（參考數(shù)量：5×10 5 至 5×10 6 cells/mL）。

2. 取相當(dāng)于所需細(xì)胞數(shù)的細(xì)胞懸浮液量，置于離心管中，離心收集培養(yǎng)細(xì)胞（參考 離心條件：4℃，250 g，離心3-5 min）。

3. 吸去上清液。

4. 加入適量程序凍存液于離心管中，混合均勻，制成細(xì)胞混合液。

5. 將離心管中的細(xì)胞混合液分裝于已標(biāo)示完全的冷凍保存管中。

6. 將凍存管直接置于-80℃冰箱中，24 h后移入液氮長期保存。

復(fù)蘇

1. 從液氮中取出凍存的細(xì)胞，立即放入37℃水浴鍋中快速解凍。

2. 待凍存管中細(xì)胞混合液完全融化后，立即逐滴加入少量細(xì)胞完全培養(yǎng)基于該冷凍 管中與細(xì)胞混合，再將細(xì)胞混合液從凍存管中移入含有8~10 mL該細(xì)胞完全培養(yǎng) 基的試管中，輕輕混合均勻。

3. 離心收集培養(yǎng)細(xì)胞（參考離心條件：4℃，250 g，離心3~5 min)，吸去上清液。

4. 加入1~2 mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。

5. 按照合適的接種密度將細(xì)胞接種到細(xì)胞培養(yǎng)容器中，加入適量的已預(yù)熱的新鮮的 細(xì)胞完全培養(yǎng)基。

6. 輕輕搖晃培養(yǎng)器皿，使細(xì)胞分布均勻。

7. 鏡檢后放置于37℃ ，5% CO2，飽和濕度的培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

主要參考文獻(xiàn)

[1] 趙新利 楊波 宋來君 杜英 阮麗榮 李紅偉 張志強(qiáng)，人胚神經(jīng)干細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇?！多嵵荽髮W(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版》2003年 第1期。