背景[1-2]
小鼠成骨細(xì)胞試劑盒適用于分離培養(yǎng)新生兒或成年小鼠的成骨細(xì)胞。小鼠成骨細(xì)胞試劑盒提供了小鼠成骨細(xì)胞的組織分離條件，分離單個細(xì)胞的效率高。此外，還能保證所分離的細(xì)胞在培養(yǎng)基中具有很高的活性。利用的成纖維抑制體系，可以程度地降低所培養(yǎng)的成骨原代細(xì)胞中成纖維細(xì)胞的含量。
生理結(jié)構(gòu)[3-6]
小鼠成骨細(xì)胞試劑盒包含：（1）OptiTDSTM小鼠成骨細(xì)胞組織解離液（2）小鼠成骨細(xì)胞組織處理緩沖液（3）FibrOutTM小鼠成骨細(xì)胞成纖維抑制劑（4）小鼠成骨組織洗液（5）小鼠成骨細(xì)胞生長因子及血清（6）小鼠成骨細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基（7）小鼠成骨組織預(yù)備液。
成骨細(xì)胞(osteoblast，OB)主要由內(nèi)外骨膜和骨髓中基質(zhì)內(nèi)的間充質(zhì)始祖細(xì)胞分化而來，能特異性分泌多種生物活性物質(zhì)，調(diào)節(jié)并影響骨的形成和重建過程。在不同成熟時期，成骨細(xì)胞在體內(nèi)表現(xiàn)為4種不同形態(tài)，即前成骨細(xì)胞(preosteoblast)、成骨細(xì)胞(osteoblast)、骨細(xì)胞(osteocyte)和隊形細(xì)胞(bonesliningcell)。前成骨細(xì)胞是成骨細(xì)胞的前體，由基質(zhì)干細(xì)胞分化，沿著成骨細(xì)胞譜系發(fā)育而成，位于覆蓋骨形成表面的成骨細(xì)胞的外側(cè)。成熟的成骨細(xì)胞是位于骨表面的單層細(xì)胞，承擔(dān)著合成骨基質(zhì)的重要功能。
骨細(xì)胞是在成骨細(xì)胞系譜中成熟和終極的分化細(xì)胞。骨細(xì)胞包埋于礦化骨組織中，淺表骨細(xì)胞仍然保留部分成骨細(xì)胞結(jié)構(gòu)。隊形細(xì)胞是排列于成體大部分骨表面的一層形態(tài)扁平或呈長方形的細(xì)胞?；钴S的成骨細(xì)胞為梭形、錐形或立方形，胞漿嗜堿性。細(xì)胞核位于細(xì)胞的一端，核仁明顯，表面有短的突起與相鄰細(xì)胞連接。
電鏡下胞漿內(nèi)具有典型的蛋白合成結(jié)構(gòu)——豐富的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及核糖體，高爾基體較發(fā)達(dá)。骨代謝過程中，成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞相互協(xié)調(diào)，使骨質(zhì)的形成與吸收處于一種動態(tài)平衡，維持骨骼的不斷更新。其中，成骨細(xì)胞是骨形成細(xì)胞，對骨組織的生長發(fā)育、骨代謝平衡、骨量平衡和骨損傷修復(fù)起關(guān)鍵作用。體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞，作為常用的體外實(shí)驗?zāi)Ｐ?，成為研究骨生理、病理及修?fù)的重要手段，也成為研究成骨細(xì)胞生長代謝及骨組織工程的基礎(chǔ)。雖然骨組織機(jī)械韌性很強(qiáng)，但利用試劑盒中提供的骨組織分離體系來分離，EDTA/EGTA處理過的薄的骨組織片能使得骨組織中成骨細(xì)胞的一些功能特性發(fā)生改變，從而將成骨細(xì)胞分離開來。
應(yīng)用[7][8]
用于細(xì)菌脂多糖通過TLR-4通路抑制小鼠成骨細(xì)胞分化及基質(zhì)礦化的分子機(jī)制研究
細(xì)菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)是細(xì)菌內(nèi)毒素的主要成分,包括特異性多糖,非特異性多糖和類脂A,其中類脂A是主要的毒性部分,而細(xì)菌內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁上的特有結(jié)構(gòu),其也是細(xì)菌主要的致熱源,有相關(guān)研究表明,細(xì)菌釋放的脂多糖是導(dǎo)致開放性骨折不愈合的主要原因。炎癥導(dǎo)致的骨折不愈合,主要是由于細(xì)菌脂多糖引起的成骨細(xì)胞炎癥反應(yīng),例如白細(xì)胞介素-1,白細(xì)胞介素-6和活化因子配基(RANKL)釋放,或者是誘導(dǎo)成骨細(xì)胞分泌破骨細(xì)胞激活因子,從而能誘導(dǎo)破骨細(xì)胞成熟和激活。但是對于細(xì)菌脂多糖如何介導(dǎo)成骨細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)的機(jī)制尚不清楚。
Toll樣受體(Toll-LIKE RECEPTOR,TLR)是參與非特異性免疫的一類重要的蛋白分子,TLR是機(jī)體天然的監(jiān)控器,可以監(jiān)視各種不同的疾病分子模式,是機(jī)體抵抗感染的首要通道。TLR可以識別細(xì)菌脂多糖,從而誘導(dǎo)分泌促炎細(xì)胞因子。Toll樣受體識別細(xì)菌脂多糖發(fā)揮炎癥作用主要是通過Toll樣受體信號傳導(dǎo)的髓樣分化因子(MyD88)依賴機(jī)制,其主要過程是,配體結(jié)合TLR后導(dǎo)致MyD88聚集在TLR的TIR結(jié)構(gòu)域,聚集后髓樣分化因子與IRAK相互作用,使其磷酸化,磷酸化后的IRAK與腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子結(jié)合,最后介導(dǎo)炎癥反應(yīng)。也就是說細(xì)菌脂多糖通過TLR介導(dǎo)的髓樣分化因子生成的炎癥因子發(fā)揮著抑制成骨細(xì)胞成骨過程。針對感染導(dǎo)致骨不連,骨折不愈合,以小鼠成骨細(xì)胞為研究對象,推測細(xì)菌脂多糖通過Toll樣受體對成骨細(xì)胞分化的影響,通過測量堿性磷酸酶的活性,骨基質(zhì)骨化、堿性磷酸酶、骨鈣蛋白和Runx2的表達(dá),明確脂多糖對于成骨細(xì)胞分化和基質(zhì)礦化的影響；同時通過核糖核酸干擾技術(shù),進(jìn)一步明確脂多糖TLR-4依賴通路對成骨細(xì)胞分化的影響。
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