背景及概述[1]
祖師麻為藥名。見(jiàn)《陜西中藥志》。又名大救駕。為瑞香科植物黃瑞香DaphnegiraldiiNitsche的根皮或莖皮。分布山西、陜西、甘肅、青海、四川等地。辛、苦，溫，有小毒。祛風(fēng)除濕，行瘀止痛。①治風(fēng)濕痹痛，四肢麻木，跌打損傷，半身不遂，感冒頭痛，胃痛及各種神經(jīng)痛。煎服，3～6g。②痰核流注、疔疽發(fā)背、皮膚癢癥，制成軟膏或硬膏貼患處。制成醑劑外用，可作發(fā)泡劑。孕婦忌服。本品含瑞香素和瑞香苷，還含芫花素、β-谷甾醇等。瑞香素對(duì)小鼠有鎮(zhèn)痛和鎮(zhèn)靜作用；皂苷部分有抗炎、消腫作用。瑞香素可降低動(dòng)物血壓，增加冠脈流量，對(duì)心肌缺血有保護(hù)作用。在體外對(duì)金黃色葡萄球菌，大腸、綠膿及福氏痢疾桿菌有抑制作用。祖師麻毒素雖也有中樞抑制作用，但應(yīng)認(rèn)為是一種毒性成分。利用色譜分析技術(shù)，對(duì)祖師麻的甲醇提取物進(jìn)行活性指導(dǎo)下的分離，發(fā)現(xiàn)了具有神經(jīng)保護(hù)作用的化合物蕘花酚。研究顯示，從祖師麻中分離出的蕘花酚可以保護(hù)培養(yǎng)的神經(jīng)元，降低H2O2和谷氨酸對(duì)其造成的損傷，提高神經(jīng)元存活率。
制備[2-3]
1）研究顯示，蕘花酚可以保護(hù)皮層神經(jīng)元，使受H2O2損傷的皮層神經(jīng)元的還原型谷光甘肽水平和抗氧化酶的活性不會(huì)明顯下降。推測(cè)蕘花酚的抗氧化損傷作用可能部分是由星形膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的。腦缺血、癲癇、創(chuàng)傷、痙攣和一些神經(jīng)退行性疾病中發(fā)生神經(jīng)元凋亡，都有谷氨酸的神經(jīng)毒性的作用。谷氨酸神經(jīng)毒性的急性表現(xiàn)形式是由Na+和K+進(jìn)入神經(jīng)元引起細(xì)胞腫脹以至死亡。由NMDA/AMPA/海人藻酸等激動(dòng)劑導(dǎo)致的遲發(fā)性神經(jīng)元退行性病變是Ca2+依賴性的，要求短時(shí)暴露在高濃度的Ca2+或長(zhǎng)時(shí)間暴露在低濃度的Ca2+。還有幾種信號(hào)通路也參與了谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)元凋亡，例如花生四烯酸以及超氧化物陰離子(O2-·)、羥基(OH·)和H2O2等氧自由基的釋放。這為進(jìn)一步蕘花酚抗谷氨酸誘導(dǎo)的神經(jīng)元損傷作用的機(jī)制提供了思路。現(xiàn)在，蕘花酚細(xì)胞內(nèi)和分子水平的作用機(jī)制還不完全清楚。但是，結(jié)果顯示該化合物對(duì)培養(yǎng)的皮層神經(jīng)元具有顯著地神經(jīng)保護(hù)作用，該作用至少部分是通過(guò)抗氧化作用實(shí)現(xiàn)的。天然產(chǎn)物可以減輕H2O2或谷氨酸導(dǎo)致的神經(jīng)毒性，這可能會(huì)為治療氧化損傷導(dǎo)致的神經(jīng)退行性疾病提供一個(gè)有用的治療方向。
2）蕘花酚誘導(dǎo)人鼻咽癌CNE細(xì)胞(簡(jiǎn)稱CNE細(xì)胞)凋亡的效應(yīng)。以不同濃度的蕘花酚作用于CNE細(xì)胞，MTT檢測(cè)分析蕘花酚對(duì)細(xì)胞增殖的影響，AnnexinV/PI雙標(biāo)后流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡情況，Westernblot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白(caspase-3、caspase-9、PARP、細(xì)胞色素C、Bax、Bcl-2)的表達(dá)。JC-1染色檢測(cè)線粒體膜電位，DCFH-DA染色檢測(cè)活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)生成。結(jié)果蕘花酚以時(shí)間和劑量依賴性方式抑制CNE細(xì)胞的增殖，蕘花酚處理誘導(dǎo)CNE細(xì)胞發(fā)生明顯凋亡，Bax/Bcl-2比值增加，細(xì)胞色素C從線粒體釋放到胞漿，caspase-3和caspase-9活化，PARP發(fā)生剪切。蕘花酚還可誘導(dǎo)CNE細(xì)胞線粒體膜電位下降，線粒體膜通透轉(zhuǎn)運(yùn)孔(PTP)開(kāi)放，ROS含量升高。結(jié)論蕘花酚可顯著誘導(dǎo)CNE細(xì)胞的凋亡，機(jī)理與影響線粒體功能密切相關(guān)。
主要參考資料
[1] 中醫(yī)大辭典
[2] 蕘花酚對(duì)H2O2和興奮性神經(jīng)遞質(zhì)誘導(dǎo)的大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞損傷的保護(hù)作用
[3] 線粒體參與蕘花酚誘導(dǎo)人鼻咽癌CNE細(xì)胞凋亡機(jī)制