"MEG-01細胞:人成巨核細胞白血病細胞系 細胞背景資料:MEG-01細胞株源自一位CML患者成巨核細胞轉換期的骨髓細胞。細胞質因子VIII和表面球蛋白IIb/IIIa,-Schiff(PAS)反應,α醋酸酯酶和酸性酶陽性。髓過氧化物酶,α酯酶,化醋酸AS-D酯酶和堿性酶陰性。用單克隆抗體BA-1(抗B細胞,粒性白細胞),HPL-3(抗球蛋白IIb/IIIa)和20.3(抗單核細胞,血小板)染色成陽性。其他淋巴和骨髓類抗體成陰性。 細胞形態(tài):淋巴母細胞樣 細胞生長:懸浮 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞傳代方法:1:2傳代。3天內(nèi)可長滿。 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系 細胞生長特性:懸浮生長 細胞傳代培養(yǎng)的胰酶消化法:傳代培養(yǎng):是指細胞從一個培養(yǎng)瓶以1:2或1:2以上的比例轉移,接種到另一培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)。傳代細胞,可根據(jù)不同細胞采取不同的方法進行細胞傳代。貼壁生長的細胞用消化法傳代,部分貼壁的細胞用直接吹打或用硅膠軟刮的刮除法傳代。懸浮細胞可采用加入等量新鮮培養(yǎng)基后直接吹打分散進行傳代,或用自然沉降法加入新培養(yǎng)基后再吹打分散進行傳代。實驗步驟:①入無菌室之前用肥皂洗手,再用75% 的酒精擦拭消毒雙手;②倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài),確定細胞是否傳代及細胞需要稀釋的倍數(shù)。將培養(yǎng)用液37℃下預熱;③超凈臺臺面應整潔,用75%酒精棉球擦拭清潔;④打開超凈工作臺的紫外燈照射臺面20min左右,關閉紫外燈,打開風機清潔空氣除去臭氧;⑤點燃酒精燈;取出無菌試管,巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮頭;過酒精燈火焰略燒后插在無菌試管內(nèi);⑥將培養(yǎng)用液瓶口用75%酒精消毒,過酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上;⑦倒掉培養(yǎng)細胞的舊培養(yǎng)基。酌情可用2-3ml Hanks液洗去殘留的就培養(yǎng)基,或用少量胰酶涮洗一下;⑧每個大培養(yǎng)瓶加入1ml胰酶,小培養(yǎng)瓶用量酌減,蓋好瓶蓋后在倒置顯微鏡下觀察。當細胞收回突起變圓時立即翻轉培養(yǎng)瓶,使細胞脫離胰酶,然后將胰酶倒掉。注意勿使細胞提早脫落入消化液中;⑨加入少量的含血清的新鮮培養(yǎng)基,反復吹打消化好的細胞使其脫壁并分散,再根據(jù)分傳瓶數(shù)補加一定量的含血清的新鮮培養(yǎng)基(7-10ml/大瓶;3-5ml/小瓶)制成細胞懸液,然后分裝到新培養(yǎng)瓶中。蓋好瓶蓋,適度擰緊后稍回轉,以利于CO2的進入,將培養(yǎng)瓶放回CO2培養(yǎng)箱;⑩對懸浮培養(yǎng)細胞,步驟7-9不做。直接將細胞懸液進行離心去除舊培養(yǎng)基上清,加入新鮮培養(yǎng)基,然后分裝到各瓶中。 公司細胞庫凍存并保種有2300多種各類細胞系。針對每種不同的細胞系,公司摸索并積累了大量細胞培養(yǎng)條件和優(yōu)化參數(shù),為您的細胞實驗保駕護航。細胞培養(yǎng)是生命科學研究中最基礎、也是最常用的實驗手段。從凍存→復蘇→傳代→實驗,在每一次細胞培養(yǎng)的過程中我們都是精心呵護,小心培養(yǎng),心里都是默默承諾:我要護你一世周全!可是可是……無數(shù)次細胞都因污染而離我而去,投入的不只是我們貌美如花的青春,還有那一去不復返的經(jīng)費!在細胞生物學,生物化學,免疫學,神經(jīng)生物學,病理學……只要涉及細胞的研究領域,都面臨著支原體污染的威脅。在眾多污染物中,也就屬支原體最狡猾了,他最善于隱藏自己,因為被支原體污染的細胞不會馬上死亡,但會改變細胞的新陳代謝,甚至會改變細胞的基因表達譜,我們就這樣被欺騙了無數(shù)次,誰讓我們就是個看“顏值”的花癡了??墒俏覀兺ㄟ^被虐了幾百次的經(jīng)驗中總結出來,當你的細胞出現(xiàn)了這些癥狀時:生長速率改變;活性減弱;形態(tài)改變;染色體畸變;轉染效率顯著降低;細胞復蘇后存活率降低……。那你就得千萬小心了,也許你的細胞已經(jīng)被支原體欺凌了! 因為細胞生長的時候肯定是要相互聯(lián)系,大部分的細胞都是要成片生長的,尤其是對于貼壁細胞,單個細胞貼壁之后長著長著就長到一片去了。但是如果是成片的細胞抱團的話,傳代后細胞是不能貼壁的,這樣抱團的細胞就會死亡。所以,消化傳代的時候一定要將細胞消化成單個單個的獨立狀態(tài),這個啊是非??季磕愕墓Ψ虻?!細胞一旦脫落入懸液里你很難再將他吹打成單個,因為他沒有受力點了。很難找到受力點讓你對他吹打的力分散開細胞。所以必須要在細胞未脫落之前將其吹打開,受力點就是細胞貼壁的地方。這樣你就必須要嚴格控制好消化的程度啊,這和大師做飯掌握好火候是一樣的道理啊。既要消化到容易吹打下來,又不能太過,一吹就整片脫落,要單個單個地往下掉。所以我才要分批分次地加胰酶消化就是為了保證不同生長狀態(tài)貼壁程度的細胞能夠都維持在好的受力點分散開。這個是很重要的一點。尤其是對于某些細胞這一點就是他活去死的致命點。像Caco-2細胞就是如此。另外關于傳代很重要一點就是一定不能等到細胞長滿的時候才去消化傳代。要在細胞長到70%左右的時候就要傳代了,一旦發(fā)現(xiàn)細胞生長中已經(jīng)有疊層生長的時候就要立即進行消化傳代。不能再拖了。關于換液傳代時候洗瓶的問題。對于用DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)的細胞,你在洗的時候如果是用無血清1640去洗細胞在隨即后的幾次中會比用DMEM洗的長的要好。同樣,用1640培養(yǎng)的也有這個現(xiàn)象。如果不嫌麻煩的話,可以用PBS來洗,洗的效果和用無血清培養(yǎng)基洗的效果基本上是一樣的,對于有些細胞會更勝一籌。洗的目的主要是洗去培養(yǎng)瓶里殘留的血清,防止它對胰酶的影響。這樣能夠保證胰酶的消化能力優(yōu)先,是很關鍵的一點。先補充這么多,還會后續(xù)更新。再補充一點:傳代時PBS洗是很重要的一步,最近發(fā)現(xiàn),用PBS就可以把細胞消化開來。加入PBS放置10-15分鐘,有些需要更長的時間,等到細胞一個個分離開來的時候,就可以直接吹打下來,但是和胰酶消化一樣,要控制好時間,不能時間太過了,要不然損傷細胞,細胞不容易成活,狀態(tài)容易不好。這個方法對于某些細胞是很管用的。有些細胞用胰酶消化不容易消化成單個的時候,或者臨時沒有胰酶了,可以選用此方法。不過一定要試試,看是否適合你的細胞。 DanG細胞系相關產(chǎn)品:207細胞、TGW細胞、T2(174 x CEM.T2)細胞 MM1-S細胞系相關產(chǎn)品:NR8383細胞、L-M (TK-)細胞、UMRC2細胞 GM03320D細胞系相關產(chǎn)品:TK.10細胞、HLEB3細胞、RH35細胞 Tb1Lu細胞系相關產(chǎn)品:J-774細胞、SUM-52細胞、BE(2)C細胞 SF-763細胞系相關產(chǎn)品:CCRF SB細胞、RH8994細胞、L細胞:細胞 SKRC-52細胞系相關產(chǎn)品:VA-ES-BJ細胞、Ly19細胞、Sci-1細胞 COLO206F細胞系相關產(chǎn)品:TC7細胞、INS1細胞、MonoMac6細胞 MOLT16細胞系相關產(chǎn)品:J774A1細胞、NCIH292細胞、NeHepLxHT細胞 LK2細胞系相關產(chǎn)品:H3396細胞、PaTu 8988 S細胞、PC-3M 2B4細胞 LTEP-a2細胞系相關產(chǎn)品:S37細胞、Intestinal Porcine Epithelial細胞:-1細胞、WRL68細胞 JTC-39細胞系相關產(chǎn)品:H460細胞、OS-RC-2細胞、MOLT-4細胞 MLE12細胞系相關產(chǎn)品:KATO 3細胞、Hs 606.T細胞、SK-ES1細胞 W256細胞系相關產(chǎn)品:HUC細胞、SNU-739細胞、SKMES1細胞 Walker-Ca.256細胞系相關產(chǎn)品:Tu 177細胞、WSU-DLCL(2)細胞、KNS42細胞 NBL-1細胞系相關產(chǎn)品:LC-1 sq細胞、Highly Aggressively Proliferating Immortalized細胞、KU19-19細胞 H226細胞系相關產(chǎn)品:H-1882細胞、SK N SH細胞、CEM.C1細胞 TE10細胞系相關產(chǎn)品:V-79-4細胞、GM12878細胞、MPC5細胞 GOS-3細胞系相關產(chǎn)品:SW-837細胞、8305C_1細胞、OV-90細胞 293/EBNA細胞系相關產(chǎn)品:LS-180細胞、Line 870 Emory University-4細胞、MC3T3, E1 subgroup-4 clone細胞 Panc 02.03細胞系相關產(chǎn)品:HES [Human embryonic skin fibroblast]細胞、VK2/E6E7細胞、CCD-841CoN細胞 MDA MB 175 VII細胞系相關產(chǎn)品:Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-5細胞、H-1623細胞、TO 175.T細胞 T98G細胞系相關產(chǎn)品:RS4:11細胞、130T細胞、NSI/1-Ag4-1細胞 CCD841CoN細胞系相關產(chǎn)品:Molm 14細胞、Hep2細胞、Hs742T細胞 SGC7901細胞系相關產(chǎn)品:Daoy細胞、Tokyo Medical and Dental university 8細胞、MDA-415細胞 16HBE140細胞系相關產(chǎn)品:NCI-SNU-475細胞、LCLC-103H細胞、BTI-TN5B1-4細胞 Rat Glomerular Endothelial細胞系相關產(chǎn)品:NCIH747細胞、JeKo-1細胞、NCI747細胞 X63-Ag8-653細胞系相關產(chǎn)品:CemT4細胞、C-4-I細胞、NCIH1155細胞 Leydig細胞系相關產(chǎn)品:CTSC-3細胞、BPH-1細胞、MC3T3-L1細胞 A375mel細胞系相關產(chǎn)品:SKLMS-1細胞、SGC-7901細胞、JHH2細胞 MT4細胞系相關產(chǎn)品:B6Tert-1細胞、XWLC-05細胞、MRC-5細胞 Pt K1細胞系相關產(chǎn)品:Ly18細胞、PZ-HPV-7細胞、H2452細胞 OE21細胞系相關產(chǎn)品:NCI-H508細胞、ECV304細胞、H64細胞 NTera2/D1細胞系相關產(chǎn)品:PK13細胞、LOUNH91細胞、HEK293A細胞 NCI-SNU-520細胞系相關產(chǎn)品:SUM-159細胞、H-2029細胞、NCIH1770細胞 WM-239細胞系相關產(chǎn)品:C8D1A細胞、Kit 225-K6細胞、2PK3細胞 VMRCRCZ細胞系相關產(chǎn)品:BE(2)-C細胞、SL1細胞、NU-GC-3細胞 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