"THP-1細(xì)胞:人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系 細(xì)胞背景資料:該細(xì)胞從一名1歲的患有急性單核細(xì)胞性白血病的男孩的外周血中分離建立。該細(xì)胞可以吞噬乳膠顆粒和激活的紅細(xì)胞,細(xì)胞膜和胞漿內(nèi)均沒有免疫球蛋白,表達(dá)C3R和FcR;可受佛波酯TPA誘導(dǎo)向單核系方向分化;可作為轉(zhuǎn)染宿主。 細(xì)胞形態(tài):淋巴母細(xì)胞樣 細(xì)胞生長:懸浮 細(xì)胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細(xì)胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細(xì)胞傳代方法:維持細(xì)胞濃度在2-4×105-8×105/ml,勿超過1×106/ml;2-3天換液1次。 細(xì)胞來源說明:細(xì)胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 細(xì)胞生長特性:懸浮生長 公司主營ATCC、DSMZ、RIKEN、ScienCell、INCELL、Promocell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國內(nèi)外著名大學(xué)來源細(xì)胞系及原代細(xì)胞,全程提供細(xì)胞系背景、生長特性、來源、器官、類型、形態(tài)、培養(yǎng)條件、應(yīng)用、系、疾病、組織、凍存條件、傳代方法等復(fù)蘇及凍存說明書信息,我們擁有豐富的細(xì)胞系培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn),能提供細(xì)胞培養(yǎng)全方位的技術(shù)支持,讓您實(shí)驗(yàn)再無煩擾!公司由在國外工作和學(xué)習(xí)多年的留學(xué)人員創(chuàng)辦,由國內(nèi)中國科學(xué)院上海生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所,復(fù)旦大學(xué),同濟(jì)大學(xué)等多名工作在線的細(xì)胞培養(yǎng)專家,提供細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)支持。公司依靠自身一些的技術(shù)和理念,以世界一流的技術(shù)支撐陣容,提供一系列細(xì)胞相關(guān)的技術(shù)服務(wù)。為中國的生命科學(xué)事業(yè)趕超歐美,提供了重要的基石;公司將依靠自主研究開發(fā)的高技術(shù)高質(zhì)量和有絕對的價(jià)格競爭力的產(chǎn)品,立足國內(nèi),面向世界。力爭打破國外大公司在細(xì)胞培養(yǎng)科學(xué)領(lǐng)域接近壟斷的地位,為中國在生命科學(xué)的這一領(lǐng)域一席之地。公司籌劃未來三年內(nèi),在沈陽、濟(jì)南、北京、西安、寧夏、武漢、等國內(nèi)代表城市建立細(xì)胞培養(yǎng)分實(shí)驗(yàn)室,以便更好的服務(wù)國內(nèi)廣大醫(yī)院、大學(xué)、制藥企業(yè)等,你們的每一份關(guān)心和支持,都是我們前進(jìn)的動(dòng)力! 可以這樣說,對于需要消化傳代的細(xì)胞,每一次的消化都是對這個(gè)細(xì)胞存活與否,狀態(tài)好與不好至關(guān)重要的考驗(yàn)。很多同學(xué)都遇到過這個(gè)問題,自己養(yǎng)的細(xì)胞開始的幾代長的還挺好的,可是穿過幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細(xì)胞不行了,狀態(tài)越來越差勁了。對于這個(gè)問題,可以非??隙ǖ卣f,你的消化環(huán)節(jié)出問題了。你每一次的消化都讓細(xì)胞受到較大損傷了。所以,越長越差。在消化的過程中,你加入胰酶后,所有細(xì)胞都在被胰酶消化著,但是我們忽視了一個(gè)問題就是,細(xì)胞的生長狀態(tài)是不一樣的,每一個(gè)細(xì)胞的貼壁情況也是不一樣的,有的貼壁牢固,有的貼壁沒有那么牢固的,所以,讓所有的細(xì)胞消化同樣的時(shí)間對細(xì)胞是不公平的,他們受到了差別待遇當(dāng)然會(huì)有脾氣的,大家爭取做到因材施教,比如試試下面的“四步消化法”。(以難消化細(xì)胞為例),具體操作:1)首先不加胰酶,倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗1-2遍(目的是將漂浮著的死細(xì)胞之類盡量洗掉)。2)然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍,這一遍是把貼壁不牢固的細(xì)胞吹打下來。再用培養(yǎng)基洗一遍,兩次所得懸液混合傳入新瓶。(你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng),以與后面胰酶消化過的細(xì)胞對比觀察看誰長的更好一點(diǎn)就知道該細(xì)胞對胰酶的敏感度了)3)吸干凈瓶內(nèi)剩余液體,加入0.3ml左右的胰酶潤洗一遍,吸掉棄之,再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同時(shí)置于顯微鏡下觀察,待細(xì)胞與細(xì)胞之間間隙明顯的時(shí)候立即吸掉胰酶,加入新培養(yǎng)基開始吹打,吹打2-3遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用2ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。(也可以傳入新瓶培養(yǎng),以與后面及前面的做對比)4)然后把前面剛吸出來的胰酶重新加進(jìn)去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細(xì)胞。當(dāng)然你也可以用新的胰酶,如果你們那比較富裕的話,繼續(xù)鏡下觀察,待剩余細(xì)胞間隙明顯,細(xì)胞獨(dú)立開來的時(shí)候,吸掉胰酶,加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)(根據(jù)實(shí)際情況把握)。 細(xì)胞消化過程總結(jié):其實(shí)絕大部分細(xì)胞消化的時(shí)候是只要用胰酶潤洗一遍即可,吸去胰酶后,殘留的那些無法計(jì)算體積的附著在細(xì)胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足夠消化細(xì)胞(絕大部分1min不到)。對于這些細(xì)胞原則上不要用胰酶孵育細(xì)胞,連續(xù)這樣傳代,對細(xì)胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去,胰酶潤洗吸去,然后37度消化。2,什么算是消化好了呢?不是細(xì)胞全部成間隔分布很離散的單個(gè)圓形才算消化好了,一般你肉眼觀察貼壁細(xì)胞層,只要能移動(dòng)了,多半呈沙壯移動(dòng),其實(shí)已經(jīng)可以了,很多人喜歡把細(xì)胞消化或者吹打成完全分離細(xì)胞,這是沒有必要的。一般能移動(dòng)了,說明細(xì)胞與培養(yǎng)基質(zhì)材料的附著已經(jīng)消失了,細(xì)胞之間的附著也已經(jīng)消失了,細(xì)胞已經(jīng)獨(dú)立分布了(雖然沒有呈現(xiàn)很廣的離散分布)。這個(gè)時(shí)候應(yīng)該停止消化,不要等到看到鏡下所有細(xì)胞都分離得非常好,間隙很大,才停止。細(xì)胞就是完全成單個(gè)細(xì)胞懸液,之后在貼壁的過程中仍然會(huì)聚集,這個(gè)是貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,尤其是腫瘤細(xì)胞的一個(gè)特性,無論死活的細(xì)胞都是如此,你可以嘗試,準(zhǔn)備100%的單個(gè)細(xì)胞懸液,貼壁后觀察細(xì)胞,仍然是幾個(gè)幾個(gè)細(xì)胞聚集在一起。一些懸浮培養(yǎng)細(xì)胞也是如此,容易聚集,不要去嘗試過幾個(gè)小時(shí)就拿出來吹打成單細(xì)胞懸液(不要笑,這個(gè)是初養(yǎng)懸浮細(xì)胞的人常犯的錯(cuò)誤,以為懸浮培養(yǎng)就是一個(gè)一個(gè)分開)。細(xì)胞只要能從基質(zhì)上脫離下來,這個(gè)時(shí)候即使是成片的(比如Calu-3細(xì)胞),吹打不超過20次后(一般10次即可),成小規(guī)模聚集(10個(gè)細(xì)胞左右),是正常的,不要試圖再去延長消化時(shí)間,或者像有的同學(xué)那樣吹打1h,等待單細(xì)胞懸液出現(xiàn)。比較難消化的細(xì)胞(潤洗方法5min還不能消化),比如HCT15, LS411和KM12,這樣的細(xì)胞一般需要用少量胰酶孵育,但也不需要很多,一般100mm dish,一次最多加入500ul,就足夠了,一般我加300ul。即使這樣難消化的細(xì)胞,一般不超過5min,即可見細(xì)胞成片移動(dòng),就應(yīng)該停止消化。一些正常細(xì)胞也會(huì)有難消化的時(shí)候,比如tsDC細(xì)胞,但也只要用少量胰酶孵育,3min左右即可看到成片沙狀移動(dòng)。 SK.MEL.2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Strain KB細(xì)胞、NIH-3T3-L1細(xì)胞、95-D細(xì)胞 32D-Cl3細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:FT-293細(xì)胞、Co 115細(xì)胞、H1581細(xì)胞 MB49細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HOC細(xì)胞、SF-763細(xì)胞、Mhh-Call 2細(xì)胞 F9細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Roswell Park Memorial Institute 8402細(xì)胞、NCI-H2052細(xì)胞、A-1847細(xì)胞 Vero E-6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI-AML4細(xì)胞、T84細(xì)胞、Walker/LLC-WRC 256細(xì)胞 FAO-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:LS 174 T細(xì)胞、CORL23細(xì)胞、NCI-H2330細(xì)胞 PM6細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1694細(xì)胞、hEEC細(xì)胞、HCT116細(xì)胞 P3J-HR-1細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:HFF1細(xì)胞、HIEC6細(xì)胞、MCF7-GFP細(xì)胞 SKMEL2細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:Tca-83細(xì)胞、SW1353細(xì)胞、GM04679細(xì)胞 Hs1.Tes細(xì)胞系相關(guān)產(chǎn)品:hCMEC/D3細(xì)胞、UT7細(xì)胞、RPTEC/TERT 1細(xì)胞 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