"KYSE-450細胞：人食管癌細胞系
細胞背景資料：詳見相關文獻介紹
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
細胞生長：貼壁
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細胞產品包裝：復蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細胞傳代方法：１：２傳代
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國外著名大學建系
細胞生長特性：貼壁生長
接收細胞相關問題：如不能在收到細胞后及時操作細胞，T２５及離心管發(fā)貨的細胞將可以消毒后在３７度過夜，血清發(fā)貨的細胞在室溫下靜置１-２天(注意不要放冰箱)，干冰發(fā)貨的可以在確認干冰未完全升華時將細胞直接放回液氮或者-８０度冰箱，若干冰完全升華，請即刻復蘇細胞。T２５瓶及離心管在培養(yǎng)箱平衡是為了讓細胞盡快適應培養(yǎng)箱環(huán)境，同時使部分因運輸導致脫落的細胞貼壁，此步驟非常必要。T２５瓶如果在顯微鏡下可以看到部分不貼壁的細胞，可以收集上清后離心(１２００rpm，５min)后，將沉淀用新的培養(yǎng)基重懸后接種至新的培養(yǎng)瓶或皿中。部分細胞在運輸過程中，由于不斷震蕩及環(huán)境不適，可能導致細胞破碎死亡，從而使培養(yǎng)基中漂浮很多細胞碎片及顆粒狀物質。這種情況下，平衡后，貼壁細胞用PBS洗兩遍再加新的培養(yǎng)基培養(yǎng)或者傳代至新瓶中培養(yǎng)即可；懸浮細胞可以離心(１０００rpm，３min)收集細胞，并用PBS重懸后再離心一次，再用新的培養(yǎng)基重懸并接種細胞。
在細胞培養(yǎng)過程中會出現這樣或那樣的問題，客戶遇到的問題從細胞生長角度來說，針對細胞培養(yǎng)過程中生長不好、甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應的解決方法。一、培養(yǎng)細胞生長不好》可能原因：細胞本身的狀態(tài)》1)細胞傳代次數多，細胞老化；2)細胞的接種量：接種量過低，細胞生長緩慢；3)細胞傳代時間過晚：細胞中毒，影響傳代后的細胞生長；4)胰酶消化時間過長或過短：時間過長，細胞死亡；時間過短，細胞未完全分離而成團，細胞死亡；5)細胞的凍存與復蘇：慢凍速融。污染：1)支原體污染；2)霉菌污染；培養(yǎng)基或血清：1)更換血清或培養(yǎng)基之前未進行驗證；2)選擇的培養(yǎng)基是否合適；3)培養(yǎng)基配制是否準確無誤；培養(yǎng)環(huán)境：1)CO2供應是否正常；2)培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確；解決方法：根據以上四個方面的可能原因，做出針對性的解決方案》1)注意細胞的本身狀態(tài)：如傳代次數、接種量等；2)避免產生污染（用正規(guī)、合法、可溯源的血清）；3)要用合適的血清或培養(yǎng)基，經過驗證；4)注意實驗室的環(huán)境；二、培養(yǎng)細胞死亡》可能原因：1)培養(yǎng)箱內無CO2；2)培養(yǎng)箱內溫度波動太大；3)細胞凍存或復蘇過程中損傷；4)培養(yǎng)液滲透壓不正確；5)培養(yǎng)液中有毒代謝產物堆積；解決方法：1)檢測培養(yǎng)箱內CO2；2)檢查培養(yǎng)箱內溫度；3)取新的保存細胞種；4)檢測培養(yǎng)液滲透壓；5)換入新鮮培養(yǎng)液。
【懸浮型細胞的傳代操作】１)吸出細胞培養(yǎng)液，放入離心管中，離心１０００rpm ５分鐘；２)吸掉上清液，加入適量之新鮮培養(yǎng)基，混和均勻后，依稀釋比例轉移至新的培養(yǎng)瓶中，以正常培養(yǎng)條件培養(yǎng)?！咀⒁馐马棥浚?嚴格的無菌操作；２)適度消化：消化的時間受消化液的種類、配制時間、加入培養(yǎng)瓶中的量等諸多因素的影響，消化過程中應該注意培養(yǎng)細胞形態(tài)的變化，一旦胞質回縮，連接變松散，或有成片浮起的跡象就要立即終止消化。附：EDTA(０.０２％四乙酸二鈉)消化液配方：EDTA ０.２０g，NaCl ８.００g，KCl ０.２０g，KH２PO４ ０.０２g，葡萄糖 ２.００g，０.５％紅４ml，加入蒸餾水定容至１０００ml。１０磅２０min高壓滅菌，使用時調節(jié)PH值到７.４。注意EDTA不能被血清中和，使用后培養(yǎng)瓶要徹底清洗，否則再培養(yǎng)時細胞容易脫壁。
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