"BHK-21 fibroblast cells倉鼠腎成纖維細胞系
細胞背景資料：詳見相關(guān)文獻介紹
細胞形態(tài)：成纖維細胞樣
細胞復(fù)蘇相關(guān)注意事項：１.取細胞的過程中注意帶好防凍手套，護目鏡。此項尤為重要，細胞凍存管可能漏入液氮，解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，可導(dǎo)致爆炸。２.凍存液的問題：凍存液的配置已是常識，在這里不作詳述，但二甲基亞砜(DMSO )對細胞不是完全無毒副作用，在常溫下，二甲基亞砜對細胞的毒副作較大，因此，必須在１-２min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復(fù)蘇溫度太慢，會造成細胞的損傷，二甲基亞砜(DMSO)選擇進口產(chǎn)品。３.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細胞解凍后二甲基亞砜濃度較高，注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度，以減少對細胞的損傷。４.離心問題：目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)，第二天換液。因為離心的目的是兩個，去除DMSO，去除死細胞，這個是標準流程，但對一般人來說，把握不好離心轉(zhuǎn)速和時間，轉(zhuǎn)的不夠活細胞沉底的少，細胞就全被扔掉了，轉(zhuǎn)過了活細胞會受壓過大，死亡。此外在操作過程中容易污染，所以不推薦。另一種說法為細胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO)，DMSO對細胞有一定的毒副作用，所以須將離心后的液體前倒凈，且一定倒干凈。我在試驗中按照常規(guī)的離心分裝的方法進行復(fù)蘇，結(jié)果無異常。５.細胞貼壁少的問題：教科書中說明凍存細胞解凍時１ml細胞液要加１０ml-１５ml培養(yǎng)液，而在我的試驗中的經(jīng)驗總結(jié)為培養(yǎng)基越少細胞越容易貼附。６.復(fù)蘇細胞分裝的問題：試驗中我的經(jīng)驗總結(jié)為復(fù)蘇１管細胞一般可分裝到１-２只培養(yǎng)瓶中，分裝過多，細胞濃度過低，不利于細胞的貼壁。７.加培養(yǎng)基的量放入問題：這個量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度，從如果你加培養(yǎng)基的太少，那么DMSO的濃度就會比較大，就會影響細胞生長，從以前的資料來看，DMSO的濃度在小于０.５%的時候?qū)σ话慵毎麤]有什么影響，還有一個說法是１%。所以如果你的凍存液的濃度是１０%DMSO的話那么加１０ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。
KE-37細胞系相關(guān)產(chǎn)品：KE39細胞、6-T CEM細胞、HM1900細胞
TOG細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Human Epidermoid carcinoma #2細胞、H441細胞、CCRF-SB細胞
MCF-7/ADR-RES細胞系相關(guān)產(chǎn)品：PT67細胞、B16-F0細胞、MDAMB-231細胞
細胞生長：貼壁
BHK-21 fibroblast cells倉鼠腎成纖維細胞系
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細胞的凍存：為避免污染造成的損失，最小化連續(xù)細胞系的遺傳改變和避免有限細胞系的老化和轉(zhuǎn)化，需要凍存哺乳細胞。凍存細胞前，細胞應(yīng)該特性化并檢查是否污染。有幾種普通培養(yǎng)基用來凍存細胞。對于包含有血清的培養(yǎng)基，成分可能如下：包含１０%甘油的完全培養(yǎng)基；包含１０%二甲基亞砜(DMSO)的完全培養(yǎng)基；５０%細胞條件培養(yǎng)基和５０%含有１０%甘油的新鮮培養(yǎng)基或５０%細胞條件培養(yǎng)基和５０%含有１０%二甲基亞砜的新鮮培養(yǎng)基。對于無血清培養(yǎng)基，一些普通的培養(yǎng)基成分可能是：５０%細胞條件無血清培養(yǎng)基和５０%包含有７.５%二甲基亞砜的新鮮的無血清培養(yǎng)基或包含有７.５%二甲基亞砜和１０%細胞培養(yǎng)級BSA的新鮮無血清培養(yǎng)基。懸浮細胞凍存：計數(shù)將要凍存的活細胞。細胞應(yīng)該處于對數(shù)生長期。以大約２００～４００g離心５分鐘沉淀細胞，使用移液管移去上清到最小體積，不要攪亂細胞。以１×１０(７)到５×１０(７)細胞/ml密度，在包含有血清的冷凍培養(yǎng)基中再次懸浮細胞，或者以０.５×１０(７)到１×１０(７)在無血清培養(yǎng)基中，再次懸浮細胞。分裝進凍存管，將凍存管置于濕冰上或放入４℃冰箱中，５分鐘內(nèi)開始冷凍步驟。細胞以１℃/分鐘進行冷凍，可以通過可編程序的冷凍器進行或者把隔離盒中的凍存管放到-７０℃到-９０℃的冰箱中，然后轉(zhuǎn)移到液氮中貯存。貼壁細胞凍存：使用分離試劑從基層分離細胞，分離時盡可能溫和，使對細胞的損傷減少到最小。在完全生長培養(yǎng)基中，再次懸浮分離細胞，確定有活力細胞數(shù)。以大約２００g離心５分鐘沉淀細胞。使用移液管移去上清到最小體積，不要攪亂細胞。以５×１０(６)到１×１０(６)細胞/ml密度，在凍存液中懸浮細胞。分裝進凍存管，將凍存管置于濕的冰上或放入４℃冰箱中，５分鐘內(nèi)開始冷凍步驟。細胞以１℃/分鐘進行冷凍，可以通過可編程序的冷凍器進行或者把隔離盒中的凍存管放到-７０℃到-９０℃的冰箱中，然后轉(zhuǎn)移到液氮中貯存。
細胞傳代方法：１：２傳代，每周換液１-２次。
H-2009細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NTera 2細胞、SJSA-1細胞、Caco2-BBE細胞
HS578T細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDA-468細胞、EAhy 926細胞、LA-N-6(OAN)細胞
NG10815細胞系相關(guān)產(chǎn)品：P30-OHK細胞、B78細胞、IOSE-80細胞
SKN-AS細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H1238細胞、Glioma-261細胞、Earle's L cells細胞
IOSE 80細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H2330細胞、NALM-6細胞、FHC細胞
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系
BHK-21 fibroblast cells倉鼠腎成纖維細胞系
細胞生長特性：貼壁生長
細胞形態(tài)特性：成纖維細胞樣
培養(yǎng)細胞真的不難，最關(guān)鍵幾點：１)所有的東西使用，如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進口的，真的很難相信你會把細胞養(yǎng)壞；２)動作要快，胰酶消化，換液什么，細胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外，要掌握好胰酶消化時間，所謂的細胞狀態(tài)差，很多時候是傳代的原因；３)有時間的話，需要細胞計數(shù)，傳相應(yīng)數(shù)目的細胞到培養(yǎng)皿中，可以大致清楚細胞的生長曲線，不會臨時要處理，手足無措；４)要做什么心里要非常清楚，合理安排時間，傳代細胞的實驗穿插進行，可以節(jié)省很多時間，也不會耽誤別人的實驗；５)個人的實驗器具自己收一套，不要和別人混用，最近換了什么新的東西稍微記一下，試劑一旦懷疑污染，馬上丟；６)傳代細胞不能進去太多人，避免相互干擾。每天對待細胞比孝敬爹媽還用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丟了，培養(yǎng)細胞時有哪些經(jīng)驗教訓(xùn)可以分享呢?１)嚴格無菌操作，多噴噴酒精，要是對滅菌的東西不放心，自己包自己送自己烘干；２)不要和別人共用試劑耗材，自己準備一套；３)有可能的話在拿到新細胞的時候做好支原體衣原體檢測；４)水浴鍋很臟，生化培養(yǎng)箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟，勤換(滅菌水加進去)；５)晚上離開的時候給傳代細胞照紫外，超凈臺是用完就開；６)是同一時間就你一個人在用傳代細胞在養(yǎng)細胞。
JB-6 Cl 30細胞系相關(guān)產(chǎn)品：U-343 MG細胞、EC-109細胞、V79細胞
HUASMC細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HC11細胞、SKLU01細胞、hTERT-HME1細胞
Normal Rat Kidney-49F細胞系相關(guān)產(chǎn)品：A-172MG細胞、Tu177細胞、HCC-1419細胞
MCF-7/ADR細胞系相關(guān)產(chǎn)品：CAL 62細胞、CRFK細胞、SCC9細胞
P3/NS1/Ag4-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：2008細胞、AA-Mel細胞、SMMC-7721細胞
NS1-Ag4細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H2196細胞、OCI-Ly 3細胞、SW-626細胞
T9細胞系相關(guān)產(chǎn)品：PLA801D細胞、CWR22-R1細胞、NCIH250細胞
UCLA-SO-M14細胞系相關(guān)產(chǎn)品：C22細胞、NCIH1563細胞、MLE 12細胞
Tsup-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：CCFSTTG1細胞、58F細胞、HCC-1954BL細胞
373MG細胞系相關(guān)產(chǎn)品：624 MEL細胞、ARPE19細胞、HMEL細胞
BHK-21 fibroblast cells倉鼠腎成纖維細胞系
RC13細胞系相關(guān)產(chǎn)品：JF305細胞、BE2-C細胞、HSC5細胞
MCA38細胞系相關(guān)產(chǎn)品：U-hth74細胞、DMS 273細胞、P3/NSI/1-AG4-1細胞
Mink Lung細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H1915細胞、HCC-44細胞、LNCaP clone FGC細胞
MDAMB468細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HT1080細胞、BC-023細胞、IM9細胞
SUM149-PT細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MHCC-LM3細胞、Vero E-6細胞、NOMO-1細胞
CoCL3細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H1355細胞、H2228細胞、T-ALL1細胞
CoCL3細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H1355細胞、H2228細胞、T-ALL1細胞
SCL1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCTC clone 1469細胞、HTR-8細胞、RWPE1細胞
A172細胞系相關(guān)產(chǎn)品：OCI-Ly 8細胞、SN12C-PM6細胞、RPMI-7951細胞
M-07e細胞系相關(guān)產(chǎn)品：KP-2細胞、TGW-nu-1細胞、NCI-H2108細胞
HMVEC細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI H226細胞、MCF12A細胞、H4細胞
EM3細胞系相關(guān)產(chǎn)品：WISH細胞、BRL3A細胞、Mino細胞
LM(TK-)細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC0015細胞、373 MG細胞、B/C3T3細胞
Colon 38細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SKMEL-31細胞、Ls-174-T細胞、SkMel31細胞
SaOS-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：A2058細胞、HO8910PM細胞、LNCaP-FGC細胞
697細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NUGC3細胞、CCD 841 CoN細胞、NCI-H841細胞
VMM39細胞系相關(guān)產(chǎn)品：A498細胞、SK-ML2細胞、KCL22細胞
Japanese Tissue Culture-28細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HuH-28細胞、Pa18C細胞、Molm14細胞
Adult Retinal Pigment Epithelial cell line-19細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Mono Mac 6細胞、HOS-MNNG細胞、LN-229細胞
Adult Retinal Pigment Epithelial cell line-19細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Mono Mac 6細胞、HOS-MNNG細胞、LN-229細胞
Ocular Choroidal Melanoma-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：XuanWei Lung Cancer-05細胞、A375-SM細胞、CHP 212細胞
OVSAHO細胞系相關(guān)產(chǎn)品：WM-266-mel細胞、Hs683T細胞、UWB1.289+BRCA1細胞
TE15細胞系相關(guān)產(chǎn)品：N-Tera-2細胞、PAEC細胞、4T1-LUC細胞
HRA19細胞系相關(guān)產(chǎn)品：UMNSAH-DF1細胞、SW-1463細胞、IGROV1細胞
CCD966SK細胞系相關(guān)產(chǎn)品：KYSE-150細胞、Hs821T細胞、YD38細胞
McA-RH7777細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-1373細胞、SUM-149細胞、SMC-1細胞
BAEC細胞系相關(guān)產(chǎn)品：C28/I2細胞、H295細胞、LK2細胞
PaTu-8988s細胞系相關(guān)產(chǎn)品：8305-C細胞、EBC-1/original細胞、SCC154細胞
Colo205細胞系相關(guān)產(chǎn)品：KBM-7細胞、RAG細胞、MHCC 97細胞
NCI H69細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SU.86.86細胞、CAL51細胞、SNU-387細胞
H2085細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Epstein-Barr-1細胞、MC3T3, E1 subgroup-4 clone細胞、H1618細胞
BE2C細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H.Ep.-2細胞、DLD1細胞、LA4細胞
X63-AG 8.653細胞系相關(guān)產(chǎn)品：LAN-5細胞、OVCAR433細胞、H-157細胞
3T6-Swiss albino細胞系相關(guān)產(chǎn)品：PC-9/S1細胞、STC-1細胞、G361細胞
SW-626細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Malme-3 M細胞、TALL 1細胞、SK-N-BE(2)細胞
COLO-320DM細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H510A細胞、L-cell細胞、PK-15細胞
H-1618細胞系相關(guān)產(chǎn)品：PCI:SG-231細胞、JROECL 33細胞、BC-019細胞
ST細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HGF-1細胞、THPI細胞、RGM-1細胞
AN-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品：U373MG細胞、COLO 320細胞、HCM細胞
NCI-H774細胞系相關(guān)產(chǎn)品：UMUC14細胞、BE2_C細胞、CCC-HEL-1細胞
P3-x63-Ag8 653細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H23細胞、NCIH2126細胞、MV3細胞
KS-SLK細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SNU-668細胞、Mink Lung細胞、Nthy-ori 3-1細胞
H2087細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MIN6細胞、HCC0827細胞、CCD-33Co細胞
NCI-H508細胞系相關(guān)產(chǎn)品：293-H細胞、NCI660細胞、JVM3細胞
NCI H295R細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-H1092細胞、RERFLCMS細胞、SUIT2細胞
HuCC-T1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HOP 62細胞、P3HR1-BL細胞、H-209細胞
NUGC2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SuDHL 1細胞、GM05887A細胞、P3/X63/Ag8.653細胞
CCD-112CoN細胞系相關(guān)產(chǎn)品：PC-3M 2B4細胞、EHEB細胞、RPMI 8402細胞
H-1734細胞系相關(guān)產(chǎn)品：JM-1細胞、3T3NIH細胞、HBL-100細胞
OCILY10細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HLF-a細胞、RSMC細胞、C3H10T1/2 clone8細胞
INS-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：BALL1細胞、22Rv1細胞、COLO 206細胞
BHK-21 fibroblast cells倉鼠腎成纖維細胞系
SNU869細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Human Corneal Endothelial Cells-12細胞、MNNG/HOS細胞、A2780CP70細胞
MKN-45細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SHSY-5Y細胞、HFT8810細胞、AG06814-M細胞
NS20Y細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MA-782細胞、J-774細胞、P3 NS1 Ag4細胞
Normal Rat Kidney-49F細胞系相關(guān)產(chǎn)品：A-172MG細胞、Hs 683細胞、MDA-MB-435 S細胞
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