1.細(xì)胞起源:
細(xì)胞簡(jiǎn)稱 BHK-21 [C-13]
細(xì)胞別稱 BHK 21; BHK21; Baby Hamster Kidney-21; Baby Hamster Kidney 21; Baby
Hamster Kidney from litter No. 21; BHK
細(xì)胞背景描述 BHK-21 [C-13]的親本細(xì)胞株是由I·A·Macpherson和M·G·P·Stoker于1961年3月從1日齡的倉(cāng)鼠建立的。隨后84天連續(xù)培養(yǎng),僅中斷8天進(jìn)行凍存,通過(guò)單細(xì)胞分離建立了13號(hào)克隆,即BHK-21 [C-13]。BHK-21 [C-13]細(xì)胞可用作轉(zhuǎn)染宿主,用于表達(dá)包含選擇及擴(kuò)增標(biāo)記的DNA的載體。
供體年齡 1日齡
組織來(lái)源 正常腎
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
細(xì)胞類型 自發(fā)永生化細(xì)胞
生長(zhǎng)特性 貼壁細(xì)胞
生物安全等級(jí) 1
2.培養(yǎng)及保藏:
完全培養(yǎng)基 RPMI-1640(PM150110)+10% FBS(164210-50)+1% P/S(PB180120)
培養(yǎng)環(huán)境 空氣,95%;CO 2,5% 37℃
凍存條件 55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 液氮
3.傳代方法:
傳代步驟
1、吸出原培養(yǎng)液;
2、加入2ml左右PBS,輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤(rùn)洗細(xì)胞,吸出PBS丟棄;
3、加入1ml左右0.25%胰蛋白酶溶液(含EDTA),輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使之浸潤(rùn)所有細(xì)胞;
4、放入培養(yǎng)箱消化,顯微鏡下看到細(xì)胞塊中間的細(xì)胞明顯變圓有間隙時(shí)可終止,全程不要拍打培養(yǎng)瓶;
5、加入3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,吹打細(xì)胞使之脫壁并在液體里反復(fù)吹打使細(xì)胞盡量呈單顆細(xì)胞的懸浮液;
6、收集細(xì)胞懸液離心,1200rpm/min 3分鐘,離心完吸出上清丟棄;
7、加入新鮮培養(yǎng)基,吹打幾下混勻細(xì)胞即可,按比例接種到新培養(yǎng)瓶,補(bǔ)足培養(yǎng)基,擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進(jìn)行培養(yǎng)。
消化時(shí)間 1~2分鐘
傳代比例(密度) 1:3-1:4
換液頻次 2~3次/周
倍增時(shí)間 ~12 hours