"PA317 Adherent逆轉錄病毒包被的NIH3T3細胞系
細胞背景資料：胚胎；成纖維細胞；NIH Swiss
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
細胞凍存復蘇材料與方法步驟：常用的細胞冷凍貯存器為液氮貯存器，規(guī)格有３５L和５０L兩種。使用時要注意以下幾點：(１)一般兩周需充液氮一次，至少一個月充氮一次。液氮溫度達-１９６℃，使用時注意勿讓液氮濺到皮膚上，以免引起凍傷。(２)液氮容器為雙層結構，中間為真空層，瓶口有雙層焊接處，應防止焊接部裂開。(３)在裝入液氮時，要注意緩慢小心，并用厚紙卷筒或特制漏斗作引導，使液氮直達瓶底，如有專用液氮灌注裝置則更好。若為初次使用，加液氮時更要緩慢，以免溫度驟降而使容器損壞。細胞凍存時常備的材料有：０.２５%胰蛋白酶，含１０%～２０%的血清培養(yǎng)液，DMSO(分析純)或無色新鮮甘油(１２１°C蒸氣高壓消毒)，２mL安瓿(或專用細胞凍存管)、吸管、離心管、噴燈、紗布袋(或凍存管架)等。主要操作步驟為：(１)選擇處于對數(shù)生長期的細胞，在凍存前一天換液。將多個培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng) 液去掉，用０.２５%胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶，加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復吹打瓶壁上的細胞，使其成為均勻分散的細胞懸液。懸浮生產(chǎn)細胞則不要消化處理。然后將細胞收集于離心管中離心(１０００r/min，１０分鐘)。(２)去上清液，加入含２０%小牛血清的完全培養(yǎng)基，于４℃預冷１５分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，細胞濃度為３×１０６～１×１０７/mL之間。(３)將上述細胞分裝于安瓿或專用冷凍塑料管中，安瓿裝１～１.５mL在火焰噴燈上封口，封口處要完全封閉，圓滑無勾。冷凍管要將蓋子蓋緊，并標記好細胞名稱和凍存日期，同時作好登記(日期、細胞種類及代次、凍存支數(shù))。(４)將裝好細胞的安瓿或凍存管裝入沙布袋內;置于液氮容器頸口處存放過夜，次日轉入液氮中。采用控制降溫速度的方法也可采用下列步驟：先將安瓿置入４℃冰箱中２～３小時，再移至冰箱冷凍室內３～４小時，再吊入液氮容器頸氣態(tài)部分存放２小時，最后沉入液氮中。細胞凍存在液氮中可以長期保存，但為妥善起見，凍存半年后，取出一只安瓿細胞復蘇培養(yǎng)，觀察生長情況，然后再繼續(xù)凍存。
細胞生長：貼壁
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
PA317 Adherent逆轉錄病毒包被的NIH3T3細胞系
細胞產(chǎn)品包裝：復蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細胞的凍存：為避免污染造成的損失，最小化連續(xù)細胞系的遺傳改變和避免有限細胞系的老化和轉化，需要凍存哺乳細胞。凍存細胞前，細胞應該特性化并檢查是否污染。有幾種普通培養(yǎng)基用來凍存細胞。對于包含有血清的培養(yǎng)基，成分可能如下：包含１０%甘油的完全培養(yǎng)基；包含１０%二甲基亞砜(DMSO)的完全培養(yǎng)基；５０%細胞條件培養(yǎng)基和５０%含有１０%甘油的新鮮培養(yǎng)基或５０%細胞條件培養(yǎng)基和５０%含有１０%二甲基亞砜的新鮮培養(yǎng)基。對于無血清培養(yǎng)基，一些普通的培養(yǎng)基成分可能是：５０%細胞條件無血清培養(yǎng)基和５０%包含有７.５%二甲基亞砜的新鮮的無血清培養(yǎng)基或包含有７.５%二甲基亞砜和１０%細胞培養(yǎng)級BSA的新鮮無血清培養(yǎng)基。懸浮細胞凍存：計數(shù)將要凍存的活細胞。細胞應該處于對數(shù)生長期。以大約２００～４００g離心５分鐘沉淀細胞，使用移液管移去上清到最小體積，不要攪亂細胞。以１×１０(７)到５×１０(７)細胞/ml密度，在包含有血清的冷凍培養(yǎng)基中再次懸浮細胞，或者以０.５×１０(７)到１×１０(７)在無血清培養(yǎng)基中，再次懸浮細胞。分裝進凍存管，將凍存管置于濕冰上或放入４℃冰箱中，５分鐘內開始冷凍步驟。細胞以１℃/分鐘進行冷凍，可以通過可編程序的冷凍器進行或者把隔離盒中的凍存管放到-７０℃到-９０℃的冰箱中，然后轉移到液氮中貯存。貼壁細胞凍存：使用分離試劑從基層分離細胞，分離時盡可能溫和，使對細胞的損傷減少到最小。在完全生長培養(yǎng)基中，再次懸浮分離細胞，確定有活力細胞數(shù)。以大約２００g離心５分鐘沉淀細胞。使用移液管移去上清到最小體積，不要攪亂細胞。以５×１０(６)到１×１０(６)細胞/ml密度，在凍存液中懸浮細胞。分裝進凍存管，將凍存管置于濕的冰上或放入４℃冰箱中，５分鐘內開始冷凍步驟。細胞以１℃/分鐘進行冷凍，可以通過可編程序的冷凍器進行或者把隔離盒中的凍存管放到-７０℃到-９０℃的冰箱中，然后轉移到液氮中貯存。
OSK-1細胞系相關產(chǎn)品：REC-1細胞、Pro-5 Lec1.3c細胞、A-549細胞
PG-4(S+L-)細胞系相關產(chǎn)品：F36P細胞、NCI-H157細胞、VCaP細胞
QGY細胞系相關產(chǎn)品：CCD-1112sk細胞、IPLB-SF-21細胞、HCC-4006細胞
細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系
Sci-1細胞系相關產(chǎn)品：Anip-973細胞、EC-9706細胞、ECC 10細胞
UMUC14細胞系相關產(chǎn)品：Mono Mac 1細胞、CT26-clone 25細胞、MNNG-HOS細胞
Oka-C1細胞系相關產(chǎn)品：H-719細胞、NCI-H322細胞、HHFK細胞
細胞生長特性：貼壁
PA317 Adherent逆轉錄病毒包被的NIH3T3細胞系
細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書
為什么培養(yǎng)的細胞要及時傳代？體外培養(yǎng)的細胞大多具有生長接觸抑制的特性，也就是說當一個細胞被其他細胞包圍的時候，它就會停止生長，及時傳代后，細胞的生長得以繼續(xù)。培養(yǎng)細胞生長減慢的原因在哪些?其解決辦法有哪些？可能的原因有：更換了不同的培養(yǎng)液或血清；培養(yǎng)液中一些細胞生長必需成分如谷眈肢或生長因子等耗盡或缺乏或己被破壞；培養(yǎng)物中有少量細菌或真菌污染；試劑保存不當；比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清等，找出其它可能的原因。解決辦法：增加起始培養(yǎng)細胞濃度；讓細胞逐漸適應新培養(yǎng)液；換入新鮮配制培養(yǎng)液；補加谷酷肢或生長因子等；用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，去棄培養(yǎng)物，或用抗生素除菌；血清需保存在５℃到２０℃; 培養(yǎng)液需在２-８℃避光保存;含血清完全培養(yǎng)液在２-８℃保存，并在２周內用完;分離培養(yǎng)物，檢測支原體。冷凍管應如何解凍？取出冷凍管后，須立即放入３７℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在１-２分鐘內大部分融化，特別注意，需殘留一小塊冰塊，就可拿到超凈工作臺操作細胞，用７５%酒精消毒凍存管，用新鮮培養(yǎng)基將細胞轉移至培養(yǎng)瓶。另外冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預防冷凍管爆裂。
NCI-460細胞系相關產(chǎn)品：CAL12T細胞、GFP-Olig2細胞、MKN-7細胞
SUP T1細胞系相關產(chǎn)品：BT-325細胞、MT-2細胞、SKNF1細胞
SN12CPM6細胞系相關產(chǎn)品：SV40-HCEC細胞、COLO 320HSR細胞、Hs-274-T細胞
DMS 79細胞系相關產(chǎn)品：SH-SY5Y Parental細胞、Cates-1B細胞、HN6細胞
HTh-74細胞系相關產(chǎn)品：Mel-MeWo細胞、HSC-I細胞、YD-15細胞
LS513細胞系相關產(chǎn)品：OCI Ly1細胞、A-10細胞、NCI-H102細胞
GM07404A細胞系相關產(chǎn)品：SNU407細胞、HTori-3細胞、CTLL(2)細胞
MEF細胞系相關產(chǎn)品：OKAC1細胞、SNT-8細胞、C8-D1A細胞
HEK293-H細胞系相關產(chǎn)品：SKNMC細胞、OCI AML4細胞、U87MG細胞
293-F細胞系相關產(chǎn)品：PC3M-IE8細胞、JIII細胞、C8161細胞
T.T細胞系相關產(chǎn)品：SNU5細胞、H1838細胞、KNS81細胞
HBE135-E6E7細胞系相關產(chǎn)品：WERIRb1細胞、NFS 60細胞、GalK1細胞
SUM-102細胞系相關產(chǎn)品：H-1651細胞、NRK 49F細胞、SKN-AS細胞
PA317 Adherent逆轉錄病毒包被的NIH3T3細胞系
CF Pac1細胞系相關產(chǎn)品：bEND.3細胞、32D-Cl3細胞、HCC-1588細胞
MM1.S細胞系相關產(chǎn)品：TKB1細胞、LM8細胞、V-79細胞
NFHIOSE-29細胞系相關產(chǎn)品：NCM356細胞、NCI-H2029細胞、NCIH1341細胞
NFHIOSE-29細胞系相關產(chǎn)品：NCM356細胞、NCI-H2029細胞、NCIH1341細胞
RTMC細胞系相關產(chǎn)品：PL 45細胞、J-111細胞、KMH-2細胞
YD38細胞系相關產(chǎn)品：AG06814-J細胞、OVCAR-8/ADR細胞、143B細胞
N9細胞系相關產(chǎn)品：KB細胞、KU-812-F細胞、HT144mel細胞
HFL-1細胞系相關產(chǎn)品：CCRF-SB細胞、RCC10RGB細胞、H196細胞
NCI-SNU-878細胞系相關產(chǎn)品：VERO C 1008細胞、CCRF-CEM C7細胞、COR L279細胞
HCC-1954細胞系相關產(chǎn)品：CMECs細胞、P3-X63Ag8細胞、EST50細胞
IB-RS-2細胞系相關產(chǎn)品：CNE細胞、RIMEC細胞、MDA-MB-435-S細胞
3LL細胞系相關產(chǎn)品：HT-22細胞、PA-TU S細胞、SH-SY5Y Parental細胞
RPMI 7951細胞系相關產(chǎn)品：X63.Ag8.653細胞、BEAS 2B細胞、SU-DHL-4細胞
OCM-1細胞系相關產(chǎn)品：BV-173細胞、GM03320D細胞、Mv1.Lu細胞
OCI-LY-1細胞系相關產(chǎn)品：Hs 445細胞、L6細胞、SMMC7721細胞
SK-N-DZ細胞系相關產(chǎn)品：A-1847細胞、EC109細胞、BEL 7405細胞
BALB/3T3 cl. A31細胞系相關產(chǎn)品：RCK-8細胞、HEK 293-F細胞、CTV-1細胞
Centre Antoine Lacassagne-85-1細胞系相關產(chǎn)品：CHP-212細胞、Caco2BBe細胞、MDA330細胞
H283細胞系相關產(chǎn)品：U266 Bl細胞、beta TC6細胞、Gerner 7666細胞
KOSC2細胞系相關產(chǎn)品：TALL-104細胞、SU-DHL2細胞、HGF-1細胞
RPE D407細胞系相關產(chǎn)品：WM115F細胞、MGHU3細胞、SW-480細胞
GM00637F細胞系相關產(chǎn)品：TMD-8細胞、H766T細胞、X63-Ag8細胞
HRGEC細胞系相關產(chǎn)品：OCI-LY-18細胞、HTR8svn細胞、RERF-LCMS細胞
M14細胞系相關產(chǎn)品：SK MEL-28細胞、T1-73細胞、Douglas Foster-1細胞
AU 565細胞系相關產(chǎn)品：Det 562細胞、OCM1細胞、WC00097細胞
SCL-I細胞系相關產(chǎn)品：WM-266-4細胞、UCLA-SO-M20細胞、NCI-H647細胞
GT39細胞系相關產(chǎn)品：NCI.H460細胞、RPMI8226細胞、HCC1588細胞
NTERA-2 cl.D1細胞系相關產(chǎn)品：GM02219細胞、HMC3細胞、B16/F1細胞
VK-2/E6E7細胞系相關產(chǎn)品：HS-445細胞、HT(H9)細胞、GLC82細胞
H35細胞系相關產(chǎn)品：OV 2008細胞、6T-CEM細胞、OVCAR8細胞
CTX TNA2細胞系相關產(chǎn)品：JB-6 Cl 30細胞、USMC細胞、C-32細胞
NRK 52E細胞系相關產(chǎn)品：OVCAR8細胞、Human Fetal Thymocyte-8810細胞、GC-1細胞
TKB1細胞系相關產(chǎn)品：Anip[973]細胞、GM05862細胞、NCI-H1694細胞
RetroPack PT67細胞系相關產(chǎn)品：MAD109細胞、CAL78細胞、T84細胞
C2A細胞系相關產(chǎn)品：HaCaT細胞、MD Anderson-Metastatic Breast-435細胞、Hs445細胞
BCPAP細胞系相關產(chǎn)品：NCCIT細胞、X63-AG 8.653細胞、COLO-357細胞
HEC-251細胞系相關產(chǎn)品：GM17346細胞、SV40-MES13細胞、MDA-MB361細胞
GC-1 spg細胞系相關產(chǎn)品：NCI-H3255細胞、CHL-CL-11細胞、NMC-G1細胞
FT-293細胞系相關產(chǎn)品：B104 [Rat neuroblastoma]細胞、ARH-77細胞、NPA87-1細胞
McARH7777細胞系相關產(chǎn)品：NCIADR.RES細胞、MRCV細胞、MASMC細胞
NG 108-15細胞系相關產(chǎn)品：GM03569B細胞、MDA-MB-436細胞、A431細胞
CV1細胞系相關產(chǎn)品：OVISE細胞、HSC細胞、H-2110細胞
PA317 Adherent逆轉錄病毒包被的NIH3T3細胞系
NRK 52E細胞系相關產(chǎn)品：OVCAR8細胞、Human Fetal Thymocyte-8810細胞、GC-1細胞
H-1944細胞系相關產(chǎn)品：SNB.19細胞、H-35細胞、Rat 2細胞
Scott細胞系相關產(chǎn)品：GOS3細胞、SCC 4細胞、SW1116細胞
ChaGo K-1細胞系相關產(chǎn)品：UCH1細胞、HIT clone T15細胞、KYSE 510細胞
UM-UC3細胞系相關產(chǎn)品：HEC1A細胞、H1299細胞、HD-LM-2細胞
LLC-PK(1)細胞系相關產(chǎn)品：Murine Leydig Tumor Cell line-1細胞、mRTEC細胞、HLMVEC細胞
VMM5A細胞系相關產(chǎn)品：CX-1細胞、Fox/NY細胞、7860細胞
T-HSC細胞系相關產(chǎn)品：SNU-119細胞、Leghorn Male Hepatoma cell line細胞、ROS17/2.8細胞
MAntle cell VERona-1細胞系相關產(chǎn)品：CORL88細胞、PASMCS細胞、Tu686細胞
KU-812細胞系相關產(chǎn)品：PC14細胞、hCMEC/D3細胞、Human Embryo Kidney-2細胞
A375細胞系相關產(chǎn)品：LOUNH91細胞、HEK 293-EBNA細胞、LS 174 T細胞
SN12CPM6細胞系相關產(chǎn)品：SV40-HCEC細胞、COLO 320F細胞、CAL 148細胞
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