"PA317 epithelioid cells逆轉(zhuǎn)錄病毒包被的NIH3T3細胞系
細胞背景資料：胚胎；成纖維細胞；NIH Swiss
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
正確的細胞復(fù)蘇需知事項：細胞凍存好了，接下來要注意什么問題呢？沒錯，就是記得到時間了，拿出來復(fù)蘇。那么，細胞復(fù)蘇的過程中又有哪些該注意的事項呢？細胞活力和形態(tài)檢查的作用何在？活力檢查——千萬不要使用不健康的細胞，可能有污染(真菌、支原體等)，如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細胞的固有形態(tài)和生長行為。凍存細胞：補充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細胞的前一天補充新的培養(yǎng)液。在細胞長至７０%單層時收獲細胞，計數(shù)活細胞數(shù)，用凍存液調(diào)整細胞密度~５ x１０６ Cell s/ml (根據(jù)不同的細胞類型調(diào)整)；凍存液——用凍存液洗細胞并用凍存液重懸細胞，有不同類型的凍存液，根據(jù)細胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有)：５-１０% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì)；５-１５%甘油；如果細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長，應(yīng)在５０%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長２４小時)內(nèi)凍存和復(fù)蘇。在凍存管上標記好細胞類型，日期，凍存人等信息，并保證每凍存管不超過１.５ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi)，因此，此步驟使用干冰，或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意，在凍存管上沒有足夠的空間記錄細胞的詳細信息，做好記錄是非常非常重要的！還有一個最重要的，一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細胞，以免其中的一個液氮罐出現(xiàn)問題！細胞正確的復(fù)蘇方式和正確的凍存方式同樣重要，熟記以下要點：當從液氮罐內(nèi)取出細胞時，有可能會出現(xiàn)凍存管破裂的情況，使用保護面罩和防護服十分必要；其實，細胞復(fù)蘇只是一個簡單的實驗，不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細節(jié)，不然，也不一定會盡如人意。例如說，人身健康方面：一定要記得做好防凍工作，戴上護目鏡；盡量降低DMSO對細胞的損傷等等。
CCC-HIE-2細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HEK293EBNA細胞、293 H細胞、Gejiu Lung Carcinoma-82細胞
MOVAS-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Human Liver-7702細胞、NCI-H460細胞、WM266細胞
CL-11細胞系相關(guān)產(chǎn)品：University of Michigan-Urothelial Carcinoma-1細胞、MGH-U3 (RN)細胞、RC13細胞
細胞生長：貼壁
PA317 epithelioid cells逆轉(zhuǎn)錄病毒包被的NIH3T3細胞系
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細胞產(chǎn)品包裝：復(fù)蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細胞的凍存：為避免污染造成的損失，最小化連續(xù)細胞系的遺傳改變和避免有限細胞系的老化和轉(zhuǎn)化，需要凍存哺乳細胞。凍存細胞前，細胞應(yīng)該特性化并檢查是否污染。有幾種普通培養(yǎng)基用來凍存細胞。對于包含有血清的培養(yǎng)基，成分可能如下：包含１０%甘油的完全培養(yǎng)基；包含１０%二甲基亞砜(DMSO)的完全培養(yǎng)基；５０%細胞條件培養(yǎng)基和５０%含有１０%甘油的新鮮培養(yǎng)基或５０%細胞條件培養(yǎng)基和５０%含有１０%二甲基亞砜的新鮮培養(yǎng)基。對于無血清培養(yǎng)基，一些普通的培養(yǎng)基成分可能是：５０%細胞條件無血清培養(yǎng)基和５０%包含有７.５%二甲基亞砜的新鮮的無血清培養(yǎng)基或包含有７.５%二甲基亞砜和１０%細胞培養(yǎng)級BSA的新鮮無血清培養(yǎng)基。懸浮細胞凍存：計數(shù)將要凍存的活細胞。細胞應(yīng)該處于對數(shù)生長期。以大約２００～４００g離心５分鐘沉淀細胞，使用移液管移去上清到最小體積，不要攪亂細胞。以１×１０(７)到５×１０(７)細胞/ml密度，在包含有血清的冷凍培養(yǎng)基中再次懸浮細胞，或者以０.５×１０(７)到１×１０(７)在無血清培養(yǎng)基中，再次懸浮細胞。分裝進凍存管，將凍存管置于濕冰上或放入４℃冰箱中，５分鐘內(nèi)開始冷凍步驟。細胞以１℃/分鐘進行冷凍，可以通過可編程序的冷凍器進行或者把隔離盒中的凍存管放到-７０℃到-９０℃的冰箱中，然后轉(zhuǎn)移到液氮中貯存。貼壁細胞凍存：使用分離試劑從基層分離細胞，分離時盡可能溫和，使對細胞的損傷減少到最小。在完全生長培養(yǎng)基中，再次懸浮分離細胞，確定有活力細胞數(shù)。以大約２００g離心５分鐘沉淀細胞。使用移液管移去上清到最小體積，不要攪亂細胞。以５×１０(６)到１×１０(６)細胞/ml密度，在凍存液中懸浮細胞。分裝進凍存管，將凍存管置于濕的冰上或放入４℃冰箱中，５分鐘內(nèi)開始冷凍步驟。細胞以１℃/分鐘進行冷凍，可以通過可編程序的冷凍器進行或者把隔離盒中的凍存管放到-７０℃到-９０℃的冰箱中，然后轉(zhuǎn)移到液氮中貯存。
細胞傳代方法：１：２-１：３傳代；每周換液２-３次。
WM 239-A細胞系相關(guān)產(chǎn)品：BCP1細胞、H-2106細胞、TE353.SK細胞
QBC-939細胞系相關(guān)產(chǎn)品：RC13細胞、TSUpr1細胞、P31/Fujioka細胞
RBE4細胞系相關(guān)產(chǎn)品：B95-8細胞、MCF-12F細胞、NCIH522細胞
ssMCF-7細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-SNU-C1細胞、NCI.H522細胞、AZ 521細胞
PC615.3細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC827細胞、LIM1215細胞、BEL7402細胞
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系
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細胞生長特性：貼壁
細胞形態(tài)特性：詳見細胞說明書
常見細胞培養(yǎng)中一些問題總結(jié)：１)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適？血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源，所以血清的含量多少會對細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為５%-１５%，不要低于５%或高過２０%，因為含量過低會導(dǎo)致細胞營養(yǎng)不足，過高則會破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為１０%，可以適量加減；２)何時須更換培養(yǎng)基？視細胞生長密度而定，或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時間，按時更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進行更換；３)購買的復(fù)蘇細胞，為何會有脫落？因為運輸?shù)倪^程中不可避免的會有震蕩，收到后可以離心收集；４)購買的細胞冷凍管經(jīng)解凍后，為何會發(fā)生細胞數(shù)目太少之情形？研究人員在冷凍細胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細胞數(shù)目太少，大都是因為離心過程操作上的失誤，造成細胞的物理性損傷，以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心，應(yīng)待細胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可；５)購買的細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因？研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳，常見原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后，加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于–８０°C太久；６)收到的冷凍管瓶身破裂，瓶蓋有裂紋，或瓶蓋脫落之原因？冷凍管瓶蓋裂紋，或瓶身破裂，可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當，造成冷凍管裂損，建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫，乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象，冷凍管有可能因此而造成細胞污染，故冷凍管于放入和取出液氮桶時，均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。
Colo699細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-2330細胞、H-661細胞、HCT116/L細胞
TM-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品：OAC-P4C細胞、HEC-1-B細胞、CCD966SK細胞
SUM 159PT細胞系相關(guān)產(chǎn)品：GM02132細胞、TE-5細胞、P3-X63Ag8.653細胞
CAL 12T細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HOS-TE85細胞、SW-1990細胞、MES-SA/Dx-5細胞
HCT 116細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H1694細胞、MOLT-16細胞、Metastatic Variant-522細胞
HTh 74細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MDA-MB-415細胞、GM00637細胞、IOSE-Mar細胞
NK-10A細胞系相關(guān)產(chǎn)品：X63細胞、EFO 27細胞、LL/2(LLc1)細胞
H520細胞系相關(guān)產(chǎn)品：EoL-1 cell細胞、NCIH660細胞、MLA-144細胞
NCIN87細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H1876細胞、NCIH841細胞、NCI-H2405細胞
NCI.H226細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HEC1-B細胞、5-8F細胞、NCI H508細胞
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COLO320/DM細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Pro-Lec1.3C細胞、Jurkat-FHCRC細胞、GOTO細胞
H295細胞系相關(guān)產(chǎn)品：T173細胞、CMK細胞、KRCY細胞
HEK 293-EBNA細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HIT clone T15細胞、NCIH211細胞、SUM-52-PE細胞
LS 1034細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MNNG-HOS (TE 85, clone F-5)細胞、LY細胞、OVCA 433細胞
BT-325細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SNU601細胞、Merwin Plasma Cell tumor-11細胞、NCI-H87細胞
639V細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs695T細胞、OPM2細胞、SUDHL-4細胞
639V細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs695T細胞、OPM2細胞、SUDHL-4細胞
Calu-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-378細胞、OP-9細胞、Hs 611.T細胞
USMC細胞系相關(guān)產(chǎn)品：UT7細胞、Hs 840.T細胞、HEK-293-F細胞
SW1088細胞系相關(guān)產(chǎn)品：P3X63NS1細胞、SUDHL-2細胞、SW-1573細胞
Colo-201細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NK-92 MI細胞、BEL 7404細胞、Ha Fe細胞
Hs 274.T細胞系相關(guān)產(chǎn)品：KU.812細胞、HECV細胞、NCIH23細胞
End1/E6E7細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Vero E6細胞、HECCL-1細胞、H1869細胞
LS123細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HS-68細胞、A-172 MG細胞、HSMC細胞
SV40-HCEC細胞系相關(guān)產(chǎn)品：IOSE-Mar細胞、Capan 2細胞、Nthy ori 3.1細胞
SCC-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH1048細胞、TE7細胞、SUM-149PT細胞
NCI-H196細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NIE-115細胞、Centre Antoine Lacassagne-12T細胞、L615細胞
H82sclc細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Y 1細胞、SCC-4細胞、Pro-5WgaRI3C細胞
3T3 Swiss Albino細胞系相關(guān)產(chǎn)品：OVTOKO細胞、BNL CL2細胞、CCK81細胞
LAN1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCE細胞、SKG-IIIa細胞、Mac-1細胞
AAV-293細胞系相關(guān)產(chǎn)品：P19細胞、A1847細胞、HECV細胞
NCIH1838細胞系相關(guān)產(chǎn)品：High Five細胞、A-20細胞、RMS 1598細胞
SW403細胞系相關(guān)產(chǎn)品：V-79細胞、no-11細胞、6T-CEM細胞
Tregs細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Epstein-Barr-3細胞、SCC9細胞、SKNBE2細胞
NCIH23細胞系相關(guān)產(chǎn)品：mIMCD-3細胞、SUPM2細胞、U-118-MG細胞
SMMC-7721細胞系相關(guān)產(chǎn)品：CCD841CoN細胞、NCIH1651細胞、L Wnt-3A細胞
N1E115細胞系相關(guān)產(chǎn)品：ST-2細胞、Calu-6細胞、Kit225 K6細胞
SPCA1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hep-G2細胞、DHL-5細胞、CCD 966 SK細胞
Centre Antoine Lacassagne-78細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-548細胞、LNT-229細胞、NTERA2-cloneD1細胞
HONE1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：T2 (174 x CEM.T2)細胞、TR-146細胞、Rin-M-5F細胞
JKT-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HEYA8細胞、NCI-SNU-449細胞、HCC0366細胞
NCI-H1417細胞系相關(guān)產(chǎn)品：KTCTL-140細胞、SNU-620細胞、HuT78細胞
MKN 7細胞系相關(guān)產(chǎn)品：MCAEC細胞、COR-L279細胞、JEG-3細胞
H-2405細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Lu-99A細胞、WiDr細胞、WM115F細胞
SN12CPM6細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SV40-HCEC細胞、COLO 320HSR細胞、Hs-274-T細胞
Li-7細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCTC clone 929細胞、Balb/3T3-4-Cl31細胞、VM-CUB-I細胞
TF-1a細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Karpas299細胞、KYSE-140細胞、S37細胞
HOP62細胞系相關(guān)產(chǎn)品：UM-RC-2細胞、SK-OV-3細胞、Ku812F細胞
SW-1990細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H-2342細胞、NB19-RIKEN細胞、SKNEP細胞
H-7721細胞系相關(guān)產(chǎn)品：TSU-Pr1細胞、TGBC-11-TKB細胞、HEp-2細胞
HuH28細胞系相關(guān)產(chǎn)品：IHH4細胞、LS 513細胞、PTK-2細胞
IGR-OV1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H1734細胞、EMT6細胞、MFD-1細胞
ECV 304細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SK-MEL24細胞、NCI-H596細胞、THLE-2細胞
H-28細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCIH2126細胞、NCI-H2228細胞、UACC-812細胞
SNU5細胞系相關(guān)產(chǎn)品：NCI-SNU-C2B細胞、Hela-Ap-1細胞、HEK 293-EBNA細胞
HuP-T3細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SK-CO-1細胞、SMMC-7721細胞、HCT-116細胞
LM2-4175細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Spodoptera frugiperda clone 9細胞、MHCC97細胞、T-98G細胞
C22 (Clara)細胞系相關(guān)產(chǎn)品：EFM-192C細胞、HCC1833細胞、NCI/ADRRES細胞
RCK8細胞系相關(guān)產(chǎn)品：HCC-1954BL細胞、NCI H929細胞、C3H 10T1/2細胞
J774A1細胞系相關(guān)產(chǎn)品：H676細胞、OVCAR 432細胞、CaEs17細胞
PATU-S細胞系相關(guān)產(chǎn)品：SHZ-88細胞、NCI-460細胞、SW620細胞
PA317 epithelioid cells逆轉(zhuǎn)錄病毒包被的NIH3T3細胞系
PLA-802細胞系相關(guān)產(chǎn)品：BC-025細胞、H1930細胞、SK-ChA1細胞
Hs 600.T細胞系相關(guān)產(chǎn)品：B 95.8細胞、RINm-5F細胞、Ej138細胞
Chinese Hamster Ovary細胞系相關(guān)產(chǎn)品：Hs934T細胞、JROECL19細胞、Rat Basophilic Leukemia-1細胞
SUM 159PT細胞系相關(guān)產(chǎn)品：GM02132細胞、OCILY10細胞、NCIH1563細胞
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