動物胞漿蛋白微量制備試劑盒

產(chǎn)品及特點 DNA 只存在于細胞核內(nèi)，因此參與轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)和 DNA 復制的蛋白質(zhì)主要存在于細胞核中，要研究蛋白質(zhì)與 DNA 的相互作用，首先需要制備能夠與 DNA 作用的天然細胞核蛋白質(zhì)。目前、細胞核蛋白質(zhì)制備方法一般都比較繁瑣，一次處理大量樣品時尤其不便，為此本公司開發(fā)了本產(chǎn)品，用于從哺乳動物組織和培養(yǎng)細胞核蛋白的微量提取，它具有下列特點：
1. 提取制備過程簡便，只需要一小時。
2. 實驗重復性好，尤其適合同時處理多個樣品。
3. 可用于培養(yǎng)的動物細胞，也可以用于組織細胞。
4. 制備的核蛋白能保持天然活性，可以直接用于轉(zhuǎn)錄因子活性分析、凝膠阻滯實驗(gel shift assay)、免疫共沉淀、Western Blotting、DNA 足跡圖實驗和甲基化干擾實驗酶活性測定等研究。
運輸及保存 低溫運輸，4℃保存，有效期一年。
自備試劑 PBS 緩沖液，PMSF 溶液，DTT 溶液

使用方法 1、 對貼壁細胞：將 5×105-7 個細胞培養(yǎng)到覆蓋率為 55-65%，吸棄培養(yǎng)基，用自備的預冷 PBS 緩沖液洗滌細胞一次，將細胞從壁上小心刮下，轉(zhuǎn)移到預冷的塑料離心管中，4℃ 3000 rpm 離心 5 分鐘，小心棄上清。直接進入第三步進行后續(xù)處理。
2、 對懸浮細胞：直接將 5×105-7 個的懸浮細胞轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 預冷的塑料離心管中，4℃ 3000 rpm 離心 5 分鐘，用自備的預冷的 PBS 洗滌細胞沉淀一次，3000 rpm 離心 5 分鐘，小心棄上清。直接進入第三步處理細胞沉淀。說明：懸浮細胞制備胞漿的效果一般好于貼壁細胞。
3、 在細胞沉淀中加入相當于沉淀細胞體積 5 倍或更多的預冷的溶液 A 重懸細胞，一般不超過 300 uL-500 uL 溶液 A。溶液 A 在臨用前好加入終濃度為 0.2mM 的 PMSF 和 1mM 的 DTT。PMSF 和 DTT 在水溶液中都不穩(wěn)定，只能臨用提加入。
4、 冰浴靜置 10 分鐘。
5、 將細胞轉(zhuǎn)移到預冷的 15 mL 的 Dounce 或 Potter 玻璃勻漿器中（溫和破裂細胞用），上下勻漿 10-15 次（為檢查效果，可取少量裂解物與自備的 0.01%Trypan Blue 溶液混合，在顯微鏡下觀察，只有破裂細胞的細胞核才能染色，完整細胞無色。如果需要，可增加勻漿次數(shù)直到 80-90%以上的細胞裂解為止 ）。
6、 小心轉(zhuǎn)移到預冷的離心管中，4℃ 17000g 離心 15 分鐘，線粒體，細胞核等細胞器將沉淀到管底。保留上清（胞漿部分）待用。