RIPA裂解液（中強度）

產(chǎn)品及特點RIPA（Radio Immunoprecipitation Assay）裂解液是一種傳統(tǒng)的細胞組織快速裂解液。RIPA 裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的 Western、IP 等實驗。本產(chǎn)品裂解能力強度溫和，對膜蛋白的處理能力一般；對核蛋白的提取能力較好；對胞漿蛋白、胞漿磷酸化蛋白和各種轉(zhuǎn)錄因子處理效果很好。本產(chǎn)品含有各種蛋白酶和磷酸蛋白酶抑制劑，能有效防止各種蛋白酶對目的蛋白的降解。我公司各種 RIPA 裂解液產(chǎn)品特點見下表：

產(chǎn)品名稱RIPA 裂解液(強)RIPA 裂解液(中)RIPA 裂解液(弱)

有效裂解成分

1% Triton

X-100, 1%

deoxycholate,

0.1% SDS

1% NP-40,

0.5%

deoxycholate,

0.1% SDS

1% NP-40,

0.25%

deoxycholate

裂解強度 強 中 溫和

對膜蛋白的提取 很好 較好 一般

對胞漿蛋白的提取 很好 很好 很好

對核蛋白的提取 很好 較好 較好

胞漿磷酸化蛋白提取 很好 很好 很好

細胞核轉(zhuǎn)錄因子提取 很好 很好 很好

含蛋白酶抑制劑 是 是 是

含磷酸酯酶抑制劑 是 是 是

主要用途 WB, IP WB, IP WB, IP, co-IP
規(guī)格及成分 成 份 產(chǎn)品編號 大立盒包裝
RIPA 裂解液（中等強度） LM131007a 250 mL
使用手冊 LM131007sc 1 份

運輸及保存 常溫運輸和保存，有效期一年。

自備試劑 PMSF

使用方法 對于培養(yǎng)細胞樣品：

1. 融解 RIPA 裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF，

使 PMSF 的最終濃度為 1mM。

2. 裂解細胞

2.1 對于貼壁細胞：去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血

清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比

例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞 1-2

秒后，細胞就會被裂解。

2.2 對于懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成 50-100 萬細胞/管，然后再裂解。

3. 充分裂解后，10000-14000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進行后續(xù)的 PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。

注意：通常 6 孔板每孔細胞加入 150 微升裂解液已經(jīng)足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。

對于組織樣品：

1. 把組織剪切成細小的碎片。

2. 融解 RIPA 裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF，使 PMSF 的最終濃度為 1mM。

3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。)

4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

5. 充分裂解后，10000-14000g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進行后續(xù)的 PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。

6. 如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

注：RIPA 裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組 DNA 等的復合物。在不檢測和基因組 DNA 結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實驗；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，例如 NF-kappaB、p53 等時，通常不必進行超聲處理，就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子。