超級雜交液（芯片雜交用）

產(chǎn)品及特點基因芯片是將大量靶基因（DNA 片段）有序地、高密度地點在玻璃片或 硅片或塑料片上等載體上所形成的矩陣?；蛐酒s交一般情況下是將待測 的兩種樣品（主要是 RNA 樣品）分別用 Cy3 和 Cy5 兩種熒光染料標記，制 備成探針與芯片雜交，雜交信號用激光掃描儀檢測，計算機分析檢測結果， 可獲得類似與傳統(tǒng)的點雜交的雜交數(shù)據(jù)，以達到快速、高效、高通量及平行 性的分析表達譜的目的。本產(chǎn)品為即用型芯片專用的雜交液，可用于各種標 記的探針（主要是 Cy3 和 Cy5 標記的 RNA 探針）跟基因芯片的雜交實驗
規(guī)格及成分 成分 編號 熱封袋包裝 
本產(chǎn)品 LM130905 10 mL
使用手冊 1 份

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑 印跡膜、去離子水、20×SSC 

使用方法一、預雜交（下面的操作以載玻片為例）

預雜交的主要作用是在加入標記探針之前從載玻片上洗去未結合的靶基 因（靶 DNA），同時封閉載玻片表面可能與標記探針進行非特異性結合的反 應性基團（如自由氨基），從而降低非特異的背景。所有的預雜交、雜交、 雜交后洗滌都在 Coplin 染缸或者顯微鏡載玻片盤等雜交盒中進行。

1. 在室溫下，將載玻片浸入裝有本產(chǎn)品的雜交盒中（本產(chǎn)品的用量根據(jù)雜 交盒的大小決定，以能夠浸埋載玻片為準）。將雜交盒在 42℃水浴中放 置 30～45 分鐘，無需震動。

2. 在室溫下用去離子水清洗載玻片數(shù)次。

3. （可選）用 100異丙醇（HPLC 級）漂洗載玻片。

4. 在加入雜交溶液之前，空氣晾干或者通過離心（室溫下以 2000g 離心 5 分鐘，有陣列的一面朝外）干燥載玻片，將干燥后的載玻片立即用于雜 交。如果載玻片干燥時間超過 1 小時，雜交效率可能會迅速下降。

二、雜交

1. 將等同于至少 1 ug polyA RNA 或 100 ug 總 RNA 的 Cy3 和 Cy5 標記 的探針 RNA 混合在一起，最終體積約為 6 μL。如果沒有這么多的，則 需要進行 RNA 擴增。

2. 將 6 μL 標記 DNA 和 30uL 本產(chǎn)品在塑料離心管中混合，得到雜交液。

3. （可選）將雜交液在微量離心機中 10,000 g 離心 5 分鐘，然后將上清液 轉(zhuǎn)移到新的塑料離心管中。本步驟以去除靶序列純化過程中帶入的微量 玻璃纖維和其他高分子質(zhì)量的顆粒。

4. 將上清液在 100℃下加熱 2 分鐘，然后在 30℃水浴中冷卻 30 秒。加熱 混合液可以降低背景。不要將溶液放置在冰上，因為可能會有沉淀析出。

5. 將適量的雜交溶液加到 DNA 微陣列上，再小心的蓋上蓋玻片，蓋玻片和 DNA 微陣列之間不能有氣泡。

6. 將載玻片置于一個空的移液器吸頭盒的上層，下層裝 5 mL 自備的 3×SSC，蓋上蓋子即得潮濕的環(huán)境。由于雜交是在很小的體積下進行的， 在密閉的潮濕保持適當?shù)碾s交適度非常重要，過分干燥則蓋玻片會粘附 在 DNA 微陣列上，背景會很高；過于潮濕則冷凝的液體會進入蓋玻片區(qū) 域，降低雜交信號。

7. 在 42℃下將載玻片溫育 14~16 小時

三、雜交后的清洗。注意在下面的所有操作過程中，一定不要讓載玻片干燥。 

1. 雜交完畢，拆卸雜交盒。如果雜交盒是浸入水浴中的，在松開螺絲之前， 仔細擦干水痕，尤其是兩個半片盒子之間的水痕。

2. 從雜交盒中取出載玻片，浸沒于大量的 0.5×SSC（含 0.01 % SDS） 溶液中，直到蓋玻片分離。

3. 蓋玻片除去后，將載玻片放到玻片夾持器上，然后浸入裝有約 250 mL 0.5×SSC（含 0.01 % SDS）溶液的避光容器中。將容器放在軌道振蕩 器上，并將載玻片振蕩 2 分鐘。

4. 將載玻片和夾持器一起浸入到另一個裝有約 250 mL 0.5×SSC 溶液的 容器中，再次將載玻片振蕩 3 分鐘。

5. 將載玻片和夾持器一起浸入到另一個裝有約 250 mL 0.1×SSC 溶液的 容器中，再次將載玻片振蕩 3 分鐘。

6. 重復上一步 2 次，每次清洗 1 分鐘。

7. 快速（<10 秒）將載玻片和夾持器一起浸入到另一個裝有約 250 mL 0.01 ×SSC 溶液的容器中，立即將載玻片放到鋪有 3M Whatman 濾紙的離 心機微量滴定板夾持器中。低速離心約 5 分鐘迅速干燥玻片。

8. 將載玻片放置在避光的盒子內(nèi)直到準備掃描。（盡量在當日內(nèi)進行掃描， 因為隨著時間的延長信號會降低）