一站式RNA電泳套裝
產品及特點本產品是包括瓊脂糖、去離子甲醛、RNA 上樣液、電泳液等在內的 RNA 電泳套裝,專門用于 RNA 電泳分析??梢赃M行至少 10 次 mini 變性膠電泳。
1. 即開即用,用戶不需要自己進行 RNase 滅活、高壓滅菌、pH 調節(jié)等操作。
2. 與 Northern 雜交等后續(xù)反應兼容。
規(guī)格及成分 成 份 編 號 大紙盒包裝
瓊脂糖 81105 5 g
超純水 100935 250 mL
甲醛 50-00-0 60 mL
RNAON(含 EB) 3130A 1.5 mL
RNARUN(MOPS 電泳緩沖液),10× 3150 100 mL
使用手冊 60904sc 1 份
運輸及保存 常溫運輸和保存,但 RNAon 長期需要-20℃保存,有效期一年。
自備試劑 EB (10 mg/mL)、DEPC 水。
使用方法注意:所有器皿(三角瓶,電泳槽,槍頭等)均需去除 RNase。強烈推薦使 用本公司的超強無毒的固相 RNase 清除劑。
一、配制瓊脂糖甲醛變性膠(1.2%, 100 mL)
1. 在三角瓶中加入下列成份: 瓊脂糖 1.2 -1.5 g 無菌水 87 mL
2. 將瓊脂糖加熱融化后,加入 10 mL 10×RNArun(注意:10×RNArun 即 10×MOPS 電泳緩沖液,瓶子一旦打開,就很容易產生污染細菌,細 菌大量繁殖后會釋放大量 RNase,所以剩下的 10×RNArun -20℃ 放置)。
3. 待膠冷卻至 60?C 左右,再加下列成份: 甲醛 3.0 mL 自備 EB (10 mg/mL) 2-4 ?L 注意:由于本試劑盒提供的 RNAon 中含 EB,所以也可以不加 EB,但 效果較差。如果使用自備的其他染料,如 SYBR Green I,則不能同時使 用其他染料,包括含 EB 的 RNAon,用戶需要另購不含 EB 的 RNAon)。
4. 混勻后倒膠, 凝固半小時后即可以使用。
二、配制電泳液
5. 將 RNArun 用超純水稀釋十倍后即成電泳液,所需要的體積根據使用的 電泳槽決定。
三、變性 RNA 樣品
6. 在一干凈的離心管中將 5-10 uL RNA 和 15 uL RNAon 混合,85℃保溫 10 分鐘后冰浴 5-10 分鐘,直接上樣。注意:每一泳道至多可分析 30 ?g RNA,通常用 10-20 ?g 總 RNA 進行 Northern 雜交,可以檢測高豐度 mRNA(占 mRNA 總量的 0.1%以上);如待測 RNA 含量極微,每個泳 道需加 0.5-3.0 ?g poly(A)+ RNA。
四、電泳
7. 電泳時,將凝膠預電泳 5 min(電壓為 5 V/cm)。隨后加樣品和分子量 對照(如果有的話),以 3-4 V/cm 的電壓電泳,直至染料遷移至膠下游 的 3/4 處。
8. 電泳結束后,在 300 nm 紫外燈下拍照。 五、后續(xù)處理
9. 按標準方法進行 Northern 雜交等后續(xù)處理。
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