一站式DNA尿素-PAGE電泳套裝

產(chǎn)品及特點(diǎn)本產(chǎn)品是專門用于 DNA 尿素-PAGE 電泳的一站式試劑盒，它具有下列特 點(diǎn):

1. 一站式，即開即用，用戶不需單獨(dú)準(zhǔn)備各種成分，十分方便。用戶不需要 單獨(dú)準(zhǔn)備各種成分。

2. 可用于 DNA 測(cè)序、AFLP、DDRT、TGGE 和 RNase 保護(hù)實(shí)驗(yàn)等。

3. 安全，免去了實(shí)驗(yàn)人員接觸粉末狀的劇毒物品丙烯酰胺。

4. 電泳后可直接用于銀染、EB 染色等實(shí)驗(yàn)。
規(guī)格及成分 成 份 編 號(hào) 大紙盒包裝 
保存 條件 電泳級(jí)尿素 100873 210g（紅蓋瓶） 常溫 電泳級(jí)丙烯酰胺 100876 60g（250mL 棕色瓶） 常溫 電泳級(jí)甲叉雙丙烯酰胺 100877 3g（橘黃蓋） 常溫 10×TBE 電泳液 90313 250 mL 常溫 電泳級(jí) TEMED 100880 1.5 mL（棕色管） 常溫 電泳級(jí)過(guò)硫酸銨 100879 1 g（藍(lán)蓋） 常溫 2×尿素-PAGE 上樣液 100874 1 mL（棕色管） 4℃ 使用手冊(cè) 90317sc 1 分 RT

運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸，保存條件見(jiàn)上表，有效期一年。

自備試劑 去離子水 

使用方法

一、PAGE 濃度和交聯(lián)度的選擇指南

尿素-PAGE 一般推薦用 29：1（丙烯酰胺：甲叉雙丙烯酰胺）的交聯(lián)度， 

二、制備尿素-PAGE 膠

1. 配制尿素-PAGE 膠（這是配制 100 mL 膠的用量，配制更大體積的膠則需 以此用量為基礎(chǔ)按比例增加） A：新鮮配制 10%的 APS（過(guò)硫酸銨）：按每 0.1 克過(guò)硫酸銨干粉加 1mL 超純水的比例將水加到裝有硫酸銨干粉的 1.5 mL EP 管中，搖晃到粉 末全部溶解。配制好的 10%的 APS 溶液可以在 4℃存放一周。

B：新鮮交聯(lián)度為 29：1 的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液（AB 溶 液，下同）：在裝有丙烯酰胺干粉的 250mL 棕色塑料瓶中加入 120 mL 自備的去離子水，然后將全部甲叉雙丙烯酰胺加入到同一塑料瓶中（可 以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來(lái)以避免粉末有毒粉末飄出。甲叉雙丙烯 酰胺溶解度低，不會(huì)溶解在這少量溶液中）。充分搖晃混勻后所得溶液 即 40%的 AB 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出 足夠空間加尿素。

B：配尿素-PAGE 膠：在一個(gè) 250 mL 的三角瓶中，先按下表的用量加入 去離子水、40%AB 溶液和 10×TBE 緩沖液。丙烯酰胺單體溶液具有 神經(jīng)毒性，一定要戴手套操作。 

C：攪拌溶解，然后用濾紙過(guò)濾。好能抽真空 10-15 分鐘以去除溶液中 的氧氣（氧氣能抑制丙烯酰胺聚合反應(yīng)），無(wú)條件也可以不脫氧。

D：加入 500uL 10%APS 和 100uL TEMED，迅速搖勻后倒膠。

E: 在膠的液面距離達(dá)到頂部時(shí)停止灌膠，插入梳子。

F: 室溫聚合 30-60 分鐘（低溫抑制聚合反應(yīng)）。

三、樣品準(zhǔn)備

2. 對(duì)一般樣品、測(cè)序樣品、微衛(wèi)星 DNA、AFLP 樣品、DDRT 樣品、RPA 樣 品：將樣品跟上樣液 1:1 混合，95℃ 3 分鐘變性，然后放冰上待用。

3. 對(duì) TGGE 樣品：可以直接上樣。 四：電泳

4. 將凝膠板固定在電泳裝置上，往上槽和下槽中加入足夠 0.5×TEB 電泳液

5. 預(yù)電泳 5-30 分鐘將冰上放置的樣品上樣。

6. 連接電源線，打開電源開關(guān)。根據(jù)膠的大小選擇功率（固定功率可以固定 產(chǎn)熱，這樣不容易發(fā)生過(guò)熱而使膠板破裂的現(xiàn)象。如果固定電流或電壓， 產(chǎn)熱都將隨電泳時(shí)間而變化，不好控制）。 對(duì)小膠一般用 5-6W 固定功率，大膠用 15-25W 固定功率。

7. 終止電泳，取出凝膠進(jìn)行后續(xù)的處理（如銀染）。注意：如果銀染，必須延 長(zhǎng)固定時(shí)間以便讓洗出尿素，否則殘留尿素會(huì)干擾后面的銀染。 

G: 拔出梳子，用 0.5×TEB 液沖洗加樣孔。