線狀DNA清除劑

產(chǎn)品及特點(diǎn) 

分離純化環(huán)狀DNA（質(zhì)粒DNA、線粒體DNA、葉綠體DNA和某些病毒DNA）的時候經(jīng)常需要去除其中的基因組DNA污染，否則會對后續(xù)的PCR、WGA和測序等反應(yīng)產(chǎn)生干擾。而基因組DNA一般都十分巨大，無論是線狀（如真核細(xì)菌基因組DNA）還是環(huán)狀(如細(xì)菌DNA)，經(jīng)過常規(guī)的DNA純化過程都會變成20-50 Kb大小的線狀DNA，而上述環(huán)狀DNA一般還能保持環(huán)狀構(gòu)型。根據(jù)這一特點(diǎn)，本公司開發(fā)了專門用于去除線狀DNA的本產(chǎn)品，它有如下優(yōu)點(diǎn)：

1. 即開即用，不需用戶花費(fèi)大量時間去摸索各種條件。

2. 酶法去除線性DNA，專一性強(qiáng)，可以使線狀DNA污染降級幾個數(shù)量級，不會干擾后續(xù)試驗(yàn)。

3. 不降解有nick和gap的環(huán)狀DNA，包括質(zhì)粒DNA、線粒體DNA、葉綠體DNA、環(huán)狀病毒DNA。

4. 處理不依賴于DNA序列，可降解任何線狀DNA。而內(nèi)切酶去除線狀DNA則需要預(yù)先確知其在環(huán)狀DNA上沒有酶切位點(diǎn)。

5. 得到的環(huán)狀DNA可用于多種后續(xù)試驗(yàn)，尤其是WGA、PCR和測序等對污染敏感的試驗(yàn)。
規(guī)格及成分 成 份 編 號 十孔盒包裝 
線狀 DNA 清除劑溶液 A 101101a 100 uL 線狀 DNA 清除劑溶液 B 101101b 30 uL 微量核酸沉淀劑 50903 2 mL 使用手冊 101101sc 1 份

自備試劑 超純水、75%乙醇

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸、-20℃保存, 有效期一年。

使用方法 

1. 在干凈塑料離心管中，按下表加入各成分（30 uL體系）：

2. 加200 uL石蠟油后，37℃保溫16小時。如果使用熱蓋打開的PCR儀則可以不加石蠟油。注意：保溫時間過短可能會形成短的DNA片段，影響后續(xù)反應(yīng)，所以保溫16小時。由于保溫時間太長，不加石蠟油或不開熱蓋則反應(yīng)體系中的水分在16小時的保溫期間會蒸發(fā)到管蓋上，嚴(yán)重影響反應(yīng)的正常進(jìn)行。

3. 65℃加熱滅活線狀DNA清除反應(yīng)的酶。

4. 反應(yīng)液可以直接使用。如果需要純化，則將30 uL酶反應(yīng)溶液轉(zhuǎn)移到一個新的1.5 mL離心管中，再加入60 uL 微量核酸沉淀劑。如果沒有使用石蠟油，則直接在30 uL酶反應(yīng)溶液中加入60 uL 微量核酸沉淀劑。注意：微量核酸沉淀劑有沉淀，取用前需要充分搖勻。

5. 室溫15000 g離心10分鐘。

6. 棄上清后加自備的75%乙醇1 mL，振蕩混勻。

7. 15000 離心3-5分鐘，棄上清。

8. 再短暫離心后小心吸棄上清，沉淀即為回收的DNA沉淀，可溶于自備超純水中后直接使用或放-20℃冰箱長期保存。