柱式糞便DNAout

產(chǎn)品及特點(diǎn)

本產(chǎn)品是動(dòng)物糞便 DNAout（CAT#：70601）的柱式升級(jí)產(chǎn)品，專門用于從各種動(dòng)物糞便中快速提取高質(zhì)量的 DNA。跟動(dòng)物糞便 DNAout，它具有下列特點(diǎn)：

1. 操作更加簡(jiǎn)單快速，一個(gè)樣品只需要十多分鐘的時(shí)間。

2. DNA 更加純凈，OD260/280 一般都在 1.8 以上，得到的 DNA 樣品原液或稀釋液可以直接用于 PCR 擴(kuò)增。

3. 每次微量提取可以處理 100-300mg 左右的樣品，能得到 5 ug 左右 DNA，片段長(zhǎng)度在 30 Kb 左右。

4. 可以同時(shí)提取到腸道上皮細(xì)胞和可能的腸道病原菌的 DNA。

5. 試劑無(wú)毒無(wú)害, 環(huán)保。
規(guī)格及成分 成 份 編 號(hào) 大紙盒包裝 
柱式糞便 DNAout 溶液 A LM80102a 25 mL 柱式糞便 DNAout 溶液 B LM80102b 25 mL 柱式糞便 DNAout 溶液 C LM80102c 40 mL 離心吸附柱 60911 50 套 通用洗柱液 60408 50 mL DNA 洗脫液 2.0 111205 10 mL 使用手冊(cè) 80102sc 1 份

運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸及保存，有效期一年。

自備試劑 氯仿。

使用方法 

1. 65℃預(yù)熱溶液 A，待其沉淀溶化后充分混勻，取 0.5 mL 加入到 1.5 mL 塑料離心管中并放置于 65℃待用。

2. 稱取 0.1-0.3 g 的糞便，加入到含預(yù)熱溶液 A 的離心管中，震蕩器上劇烈震蕩5-10 分鐘。如果是擴(kuò)量操作，可以使用更多糞便和較大離心管。也可以將同一種糞便在較大離心管中震蕩處理，然后再分到 1.5 mL 離心管中。注意:不論使用大的還是小的離心管，一定要讓管底的糞便震蕩起來(lái)。

3. 將離心管置于 65℃水浴中保溫至少 5 分鐘。

4. 12000-15000 g 室溫離心 3 分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到一新離心管中(上清液一般呈淡黃色或深棕色，實(shí)際顏色隨樣品而異，上清液的體積一般為 300-400 μL)。

5. 在上清液中加入等體積的溶液 B，上下顛倒 30 秒充分混勻，溶液將呈白色或淡黃色混濁狀。

6. 將離心管冰浴至少 5 分鐘。 

7. 12000-15000 g 室溫離心 3 分鐘，轉(zhuǎn)移上清到新的 1.5 mL 離心管中，上清液顏色將比第 4 步得到的上清的顏色稍淡，體積在 0.7 mL 左右。

注意：下面第 8-第 9 步的氯仿抽提操作可以省略，直接進(jìn)入第 10 步，但 DNA 的產(chǎn)量會(huì)低 50%左右，OD260/280 在 1.7-1.8。如果直接進(jìn)入第 10 步，則轉(zhuǎn)移的溶液體積不要超過(guò) 0.6 mL，否則沒(méi)有空間加溶液 C。

8. 加入 0.2 mL 的氯仿(自備)，震蕩器上充分振蕩 30 秒混勻。注意:一定要讓管底的溶液震蕩起來(lái)。

9. 12000-15000 g 室溫離心 3 分鐘，小心轉(zhuǎn)移上清到新離心管中。說(shuō)明：離心后兩相交界面將有白色膜狀物，其中有機(jī)相部分顏色較深，一般呈淡棕色。將0.5 mL 上清轉(zhuǎn)移到新的 1.5 mL 離心管中。如果有多余的可以棄之不用。

10. 加入 0.8 mL 的溶液 C，上下顛倒 30 秒混勻。

11. 分兩次上柱（即先轉(zhuǎn)移一半的混合液到離心吸附柱中，12000-15000 g 室溫離心半分鐘，棄穿透液，然后再將剩下的混合液到離心吸附柱中，12000-15000g 室溫離心半分鐘，棄穿透液）。

12. 加 0.7 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12000-15000 g 室溫離心半分鐘，棄穿透液。

13. 如果有必要，可以再加 0.3 mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12000-15000 g室溫離心半分鐘，棄穿透液。增加一步洗滌能使后得到的 DNA 的純度稍有提高，但產(chǎn)量稍微有所降低。

14. 12000-15000 g 室溫再離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的通用洗柱液會(huì)污染 DNA。

15. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到一新的 1.5 mL 塑料離心管中，加入 50-100 uL DNA 洗脫液 2.0。

16. 室溫放置離心吸附柱 1-2 分鐘。

17. 12000-15000 g 室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為 DNA 樣品，可以立即使用或存放于冰箱待用。