產(chǎn)品說(shuō)明
與質(zhì)譜檢測(cè)耦合的賴(lài)氨酸探針
該產(chǎn)品包含在以下化合物庫(kù)中:
- FDA-approved Drug Library
質(zhì)量控制
化學(xué)性質(zhì)
| CAS號(hào) | 58-85-5 | ? | ? |
| 別名 | D-Biotin,Vitamin H |
| 分子式 | C10H16N2O3S | 分子量 | 244.31 |
| 溶解性 | >24.4mg/mL in DMSO | 儲(chǔ)存條件 | Store at -20° |
?
實(shí)驗(yàn)操作
| 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)[2]： |
| 細(xì)胞系 | |
| 溶解方法 | 可以溶于有機(jī)溶劑DMSO或者DMF中，為了獲得更高的濃度，可以將離心管在37℃加熱10分鐘和/或在超聲波浴中震蕩一段時(shí)間。原液可以在-20℃以下儲(chǔ)存幾個(gè)月。 |
| 反應(yīng)時(shí)間 | 室溫下放置1h |
| 應(yīng)用 | 生物素標(biāo)記蛋白： Biotinyl-N-hydroxysuccinimide (BNHS) 能夠誘導(dǎo)生物素部分進(jìn)入蛋白，為了得到期望的BNHS與蛋白游離氨基的摩爾比值，將0.1 M NaHCO（含10 mg/ml蛋白質(zhì)）與不同體積的0.1 M 的BNHS溶液混合，混合物室溫下孵育1h后，在4℃下用不同濃度的PBS透析24h。透析之后，加入等體積的甘油后-20℃保存。BNHS 溶液應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用。2, 4, 6-三硝基苯磺酸可以用來(lái)檢測(cè)對(duì)照或者生物素化的蛋白質(zhì)中的游離氨基。與IgG共價(jià)結(jié)合的總biotin可以通過(guò)鏈霉素結(jié)合試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)。 |
| 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)[3]： |
| 動(dòng)物模型 | |
| 劑量 | |
| 注意事項(xiàng) | |
| References: [1.][1]. JEAN-LUC GUESDON, THERESE TERNYNCK AND STRATIS AVRAMEAS. The Use of Avidin-Biotin Interaction in Immunoenzymatic Techniques. THE JOURNAL OF HISTOCHEMISTRY AND CYTOCHEMISTRY. 1979. |
產(chǎn)品描述
NHS-生物素修飾是一種特定的賴(lài)氨酸探針，可以耦合質(zhì)譜檢測(cè)，在過(guò)去幾年中越來(lái)越多地被應(yīng)用，可以評(píng)估蛋白質(zhì)或復(fù)合物的氨基酸可及性，作為可替代的行之有效的方法1。
許多應(yīng)用已經(jīng)報(bào)道NHS-biotin作為特定的賴(lài)氨酸探針2，其應(yīng)用越來(lái)越多，已經(jīng)有大量的報(bào)道闡述了其應(yīng)用2?？梢杂糜谂卸ò被岬谋砻婵杉靶?，用于表位作圖中劃定蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)界面4。
Sulfo-NHS-biotin試劑與模型肽33和3,30-Dithiobis[sulfosuccinimidyl propionate] (DTSSP) 發(fā)生反應(yīng)，標(biāo)記含有羥基的氨基酸5。如果含羥基的基團(tuán)位于組氨酸殘基的兩個(gè)位置，絲氨酸、酪氨酸和蘇氨酸殘基可以與Sulfo- NHS-biotin 發(fā)生反應(yīng)6，這些羥基通過(guò)氫鍵與組氨酰殘基的相互作用，增強(qiáng)這些含羥基基團(tuán)的內(nèi)在反應(yīng)性，有助于增加其親核性。
使用NHS-生物素衍生物檢測(cè)DTSSP的開(kāi)拓觀察：絲氨酸和酪氨酸殘基的羥基基團(tuán)也與伯胺試劑反應(yīng)，絲氨酸標(biāo)簽可能會(huì)丟失，導(dǎo)致脫水肽形成。生物素試劑的應(yīng)用導(dǎo)致通過(guò)鏈霉親和素的親和富集3，通過(guò)分光光度測(cè)定法對(duì)每個(gè)多肽的標(biāo)簽進(jìn)行絕對(duì)定量。
使用整套Sulfo-NHS-biotin試劑可以檢測(cè)到不同的離子的有效且可靠的離子分配。
參考文獻(xiàn)：
1.? G. Gabant, J. Augier et al, Assessment of solvent residues accessibility using three Sulfo-NHS-biotin reagents in parallel: application to footprint changes of a methyltransferase upon binding its substrate, J. Mass Spectrom. 2008; 43: 360–370
2.? Glocker MO, Borchers C, Fiedler W, Suckau D, Przybylski M. Molecular characterization of surface topology in protein tertiary structures by amino-acylation and mass spectrometric peptide mapping. Bioconjugate Chem. 1994; 5: 583.
3.? Azim-Zadeh O, Hillebrecht A, Linne U, Marahiel MA, Klebe G, Lingelbach K, Nyalwidhe J. Use of biotin derivatives to probe conformational changes in proteins. Journal of Biological Chemistry 2007; 282: 21609
4.? Borch J, Jorgensen TJ, Roepstorff P. Mass spectrometric analysis of protein interactions. Current Opinion in Chemical Biology2005; 9: 509.
5.? Swaim CL, Smith JB, Smith DL. Unexpected products from the reaction of the synthetic cross-linker 3, 3’ dithiobis(sulfosuccinimidyl propionate), DTSSP with peptides. Journal of the American Society for Mass Spectrometry 2004; 15:736.
6.? Miller BT, Kurosky A. Elevated intrinsic reactivity of seryl hydroxyl groups within the linear peptide triads His-Xaa-Ser or Ser-Xaa-His. Biochemical and Biophysical Research Communications 1993; 196: 461.
溫馨提示：不可用于臨床治療。