??????碧云天的Rat IL-4 ELISA Kit (Rat Interleukin-4 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即大鼠白細胞介素4酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測大鼠血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液中的IL-4的ELISA試劑盒。
??????本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強，重復性好。多次重復檢測結果表明，最小檢出量為16pg/ml，與GDNF、GM-CSF、IFN-γ、IL-1α、IL-1β、IL-12、IL-6、IL-10、PDGF-BB、TNF-α、人IL-4和小鼠IL-4等均沒有交叉反應，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
??????IL-4是一種多效應細胞因子，主要由嗜堿性粒細胞、嗜酸性粒細胞、肥大細胞和Th2細胞等多種細胞分泌，在許多細胞中均能夠發(fā)揮免疫調節(jié)功能。IL-4作為B細胞的激活因子，其能夠調解B細胞表面免疫球蛋白的分型轉換，尤其是IgG和IgE之間的轉換。IL-4還能夠調控前體輔助T細胞向Th2亞型分化。IL-4與TNF-α協(xié)同作用能夠誘導血管內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞表面VCAM-1的表達，從而選擇性招募嗜酸性粒細胞和淋巴細胞到達炎癥部位。同時，IL-4還能下調IL-1,TNF-α和PGE2等炎癥因子的產(chǎn)生。此外，IL-4在體內(nèi)外均表現(xiàn)出了一定的抗腫瘤活性。
??????成熟的大鼠IL-4是由147個氨基酸減掉23個氨基酸的信號肽所剩余的124個氨基酸組成，結構上包含4個糖基化位點和7個半胱氨酸殘基，其中的6個半胱氨酸殘基參與形成3個分子間二硫鍵，從而保證IL-4活性。成熟的大鼠IL-4分別與小鼠IL-4和人IL-4具有60%和44%的氨基酸同源性。
??????IL-4首先與IL-4 Rα亞基結合，之后該復合物與輔助受體鏈γ_c或IL-13 Rα結合。在JAK的作用下，受體C端發(fā)生磷酸化，隨后形成二聚體。這一過程導致STAT6被募集并發(fā)生磷酸化，磷酸化的STAT6發(fā)生構象改變，形成二聚體，轉移至細胞核內(nèi)，對多種靶基因的轉錄進行調控激活。
??????本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中大鼠IL-4的的濃度，其原理見圖1。大鼠IL-4特異的單克隆捕獲抗體已預包被于酶標板上，當加入標準品或樣品時，其中的大鼠IL-4會與捕獲抗體結合。當加入生物素化的抗大鼠IL-4抗體后，生物素化抗大鼠IL-4抗體與大鼠IL-4結合，形成夾心的免疫復合物。隨后加入辣根過氧化物酶標記Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。大鼠IL-4濃度與A450值呈正比，通過繪制標準曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中靶蛋白濃度。

圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。

??????一個包裝的本試劑盒，包括標準品檢測，可以進行96次檢測。
包裝清單：

保存條件：
??????除標準品外，4℃保存6個月內(nèi)有效。標準品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效。
注意事項：
??????由于標準品一般是凍干粉，在制備后需要嚴格校準，所以標準品的瓶數(shù)及每瓶標準品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標準品標簽上的標注為準。
??????洗滌液(20X)在低溫下可能有結晶，如果發(fā)現(xiàn)有結晶，請室溫水浴加熱使結晶完全溶解后再配制工作液。
??????為保證標準品的精確性，標準品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
??????TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
??????加樣時，請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
??????不宜混用不同批號的試劑盒組份，每批次試劑盒均經(jīng)過獨立測試。
??????充分混勻對保證反應結果的精準性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
??????本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導致最終檢測到的吸光度顯著下降。
??????洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導致結果誤差較大。
??????檢測標準品和樣品時建議設置重復孔，以確保檢測結果的可信度。
??????加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。