??????碧云天的Rat IL-4 ELISA Kit (Rat Interleukin-4 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即大鼠白細(xì)胞介素4酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)大鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IL-4的ELISA試劑盒。
??????本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明，最小檢出量為16pg/ml，與GDNF、GM-CSF、IFN-γ、IL-1α、IL-1β、IL-12、IL-6、IL-10、PDGF-BB、TNF-α、人IL-4和小鼠IL-4等均沒(méi)有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
??????IL-4是一種多效應(yīng)細(xì)胞因子，主要由嗜堿性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞和Th2細(xì)胞等多種細(xì)胞分泌，在許多細(xì)胞中均能夠發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能。IL-4作為B細(xì)胞的激活因子，其能夠調(diào)解B細(xì)胞表面免疫球蛋白的分型轉(zhuǎn)換，尤其是IgG和IgE之間的轉(zhuǎn)換。IL-4還能夠調(diào)控前體輔助T細(xì)胞向Th2亞型分化。IL-4與TNF-α協(xié)同作用能夠誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞表面VCAM-1的表達(dá)，從而選擇性招募嗜酸性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞到達(dá)炎癥部位。同時(shí)，IL-4還能下調(diào)IL-1,TNF-α和PGE2等炎癥因子的產(chǎn)生。此外，IL-4在體內(nèi)外均表現(xiàn)出了一定的抗腫瘤活性。
??????成熟的大鼠IL-4是由147個(gè)氨基酸減掉23個(gè)氨基酸的信號(hào)肽所剩余的124個(gè)氨基酸組成，結(jié)構(gòu)上包含4個(gè)糖基化位點(diǎn)和7個(gè)半胱氨酸殘基，其中的6個(gè)半胱氨酸殘基參與形成3個(gè)分子間二硫鍵，從而保證IL-4活性。成熟的大鼠IL-4分別與小鼠IL-4和人IL-4具有60%和44%的氨基酸同源性。
??????IL-4首先與IL-4 Rα亞基結(jié)合，之后該復(fù)合物與輔助受體鏈γ_c或IL-13 Rα結(jié)合。在JAK的作用下，受體C端發(fā)生磷酸化，隨后形成二聚體。這一過(guò)程導(dǎo)致STAT6被募集并發(fā)生磷酸化，磷酸化的STAT6發(fā)生構(gòu)象改變，形成二聚體，轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核內(nèi)，對(duì)多種靶基因的轉(zhuǎn)錄進(jìn)行調(diào)控激活。
??????本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測(cè)樣品中大鼠IL-4的的濃度，其原理見(jiàn)圖1。大鼠IL-4特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的大鼠IL-4會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗大鼠IL-4抗體后，生物素化抗大鼠IL-4抗體與大鼠IL-4結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來(lái)而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過(guò)氧化物酶就會(huì)催化無(wú)色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。大鼠IL-4濃度與A450值呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中靶蛋白濃度。

圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。

??????一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
包裝清單：

保存條件：
??????除標(biāo)準(zhǔn)品外，4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。
注意事項(xiàng)：
??????由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
??????洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
??????為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
??????TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
??????加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
??????不宜混用不同批號(hào)的試劑盒組份，每批次試劑盒均經(jīng)過(guò)獨(dú)立測(cè)試。
??????充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
??????本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
??????洗滌過(guò)程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
??????檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
??????加樣過(guò)程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。