??????碧云天的Rat IL-2 ELISA Kit (Rat Interleukin-2 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即大鼠白細(xì)胞介素2酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)大鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IL-2的ELISA試劑盒。
??????本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明，最小檢出量為36pg/ml，與大鼠GDNF、IL-4、PDGF-BB、TNF-α，人IL-2，小鼠IL-2等沒有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
??????IL-2即白細(xì)胞介素-2(簡(jiǎn)稱白介2)，也稱為T cell growth factor (TCGF)，是一種分子量約為15-18kDa的糖基化α螺旋多肽，屬于γc細(xì)胞因子家族，以單體形式存在，半衰期極短(<30min)。成熟的大鼠IL-2是由155個(gè)氨基酸剪掉20個(gè)氨基酸的信號(hào)肽所剩余的135個(gè)氨基酸組成，成熟結(jié)構(gòu)域自然狀態(tài)下呈α螺旋結(jié)構(gòu)，翻譯后加工包括第三位Thr位點(diǎn)的O-糖基化和二硫鍵的形成。蛋白鏈中有三個(gè)半胱氨酸殘基(Cys)，位于第58、105和125位。58位和105位半胱氨酸殘基結(jié)合形成二硫鍵是蛋白具有活性的必備前提。成熟的大鼠IL-2與人和小鼠IL-2的氨基酸同源性分別達(dá)66%和73%。雖然人IL-2與小鼠IL-2的氨基酸同源性僅有60%，但是人IL-2可以激活小鼠細(xì)胞上的IL-2受體。γδT細(xì)胞、活化的CD4⁺和CD8⁺ T細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和造血干細(xì)胞等均能夠分泌IL-2。
??????IL-2受體(IL-2R)是異源三聚體，由55kDa的CD25/IL-2 Rα鏈、70kDa的IL-2 Rβ和65kDa的γ_c鏈組成。IL-2首先與IL-2 Rα結(jié)合形成二元復(fù)合物，然后募集IL-2 Rβ和γ_c形成四聚體的信號(hào)復(fù)合物。除了IL-2，IL-2 Rβ同時(shí)也是IL-15四聚體信號(hào)復(fù)合物的組成部分，而γ_c是IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21受體所共有的公共鏈。
??????IL-2在抗體刺激引起的不同反應(yīng)階段的T細(xì)胞，自然殺傷細(xì)胞和B細(xì)胞的細(xì)胞增殖方面起重要的作用，此外，IL-2還可調(diào)節(jié)γ干擾素、主要組織相容性抗原的表達(dá)，刺激活化的B細(xì)胞的增殖和分化，提高自然殺傷細(xì)胞的活性和抑制粒細(xì)胞/巨噬細(xì)胞的增殖。IL-2還可誘導(dǎo)少膠突細(xì)胞的增殖和分化。
??????IL-2與其受體結(jié)合后通過磷酸化作用激活JAK-STAT信號(hào)通路，將信號(hào)傳遞至細(xì)胞核實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)基因的調(diào)控作用。此外，在Shc蛋白的作用下，IL-2還可以通過形成Grb2/SOS復(fù)合物實(shí)現(xiàn)對(duì)下游Ras/Raf/MEK/MAPK和PI3K/Akt/P70S6K等多種信號(hào)通路的激活。
??????本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測(cè)樣品中大鼠IL-2的濃度，其原理見圖1。大鼠IL-2特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的大鼠IL-2會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗大鼠IL-2抗體后，生物素化抗大鼠IL-2抗體與大鼠IL-2結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin?(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會(huì)催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。大鼠IL-2濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中IL-2濃度。

圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。

??????一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
包裝清單：

保存條件：
??????除標(biāo)準(zhǔn)品外，4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。
注意事項(xiàng)：
??????由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
??????洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
??????為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
??????TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
??????加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
??????不宜混用不同批號(hào)的試劑盒組份，每批次試劑盒均經(jīng)過獨(dú)立測(cè)試。
??????充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
??????本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
??????洗滌過程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
??????檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
??????加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。