人多能干細胞分化培養(yǎng)基
產(chǎn)品基本信息
Applied CellTM人多能干細胞（ES/iPS）分化培養(yǎng)基
基礎培養(yǎng)基2-8℃，添加劑-20～-80℃；
混勻后2-8℃，2周內使用完畢。
產(chǎn)品簡介
人多能干細胞分化培養(yǎng)基是埃澤思生物科技有限公司（Applied CellTM）研發(fā)的一款適用于人多能干細胞誘導分化的培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基可用于EB（擬胚體）的形成。擬胚體是人多能干細胞在懸浮培養(yǎng)條件下形成的球狀結構，可用于細胞多能性檢測，形成擬胚體可驗證細胞分化潛能。
產(chǎn)品特性
產(chǎn)品內容
hPSC Differentiation Basal Medium
人多能干細胞分化基礎培養(yǎng)基
hPSC Differentiation Supplement
人多能干細胞分化添加劑
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操作方法
實驗準備
人多能干細胞分化培養(yǎng)基配制：
1.1 在2-8℃解凍人多能干細胞分化添加劑，輕晃搖勻；
1.2 隨后將添加劑加入到人類多能干細胞分化基礎培養(yǎng)基中（每10mL添加劑與500mL分化基礎培養(yǎng)基徹底混合）混勻即為人多能干細胞分化培養(yǎng)基（AC-1001002）。人多能干細胞分化培養(yǎng)基可在2-8℃穩(wěn)定儲存2-3周。
注意：
1. 人多能干細胞分化添加劑只能在2-8℃解凍，可按實際用量對添加劑進行分裝，分裝后立即使用或儲存于-20℃至-80℃保存。
2. 人多能干細胞分化培養(yǎng)基使用前建議在室溫平衡10-20min，不建議在37℃加熱。
實驗操作(以6孔板為例)
2.1 在顯微鏡下觀察人多能干細胞，確認細胞匯合度達到70–80%，準備傳代。
2.2 清洗：拿出培養(yǎng)板,吸掉原有培養(yǎng)基，沿培養(yǎng)皿邊緣緩慢加入37℃預熱PBS緩沖液，輕輕晃動沖洗，然后吸去PBS緩沖液；
2.3 消化：在培養(yǎng)板中加入1.5mL人多能干細胞無酶消化液（AC-1001008）使之覆蓋皿
底，并置于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中孵育2~5 min；
2.4 吹打：吸掉人多能干細胞消化液（AC-1001008）后，立刻加入室溫平衡好的人
多能干細胞分化培養(yǎng)基，用移液槍扇形吹打培養(yǎng)皿底，吹打次數(shù)保持在
3~5次，使皿底貼附的干細胞集落脫落，輕柔緩慢吹吸混勻，制成干細胞懸液；
注意：吹吸皿底細胞的力度要輕柔，吹打脫落和吹吸混勻的次數(shù)在3~5次為宜，盡量避免形成單細胞。如有少量細胞無法從皿底脫落，屬于正?，F(xiàn)象。如有大量細胞無法從皿底脫落，需延長消化時間。
3.5制備擬胚體
3.5.1懸滴培養(yǎng)法制備擬胚體
稀釋：將細胞懸液稀釋，細胞密度約為1-2×105cells/mL；
制備懸滴：將稀釋好的細胞懸液以30-50uL/滴(3000-7000 cells/滴),均勻接種在培養(yǎng)皿皿蓋內面，翻轉培養(yǎng)皿蓋將其扣回加有PBS的培養(yǎng)皿上（加入PBS防止懸滴蒸發(fā)），放入37℃，5%CO2箱中培養(yǎng)；
3-4天后，非貼壁型培養(yǎng)皿中預先加入人多能干細胞分化培養(yǎng)基，將培養(yǎng)皿蓋上的懸滴轉移至培養(yǎng)皿中（6cm培養(yǎng)皿加入3-4mL培養(yǎng)基)中，可觀察到明顯的擬胚體結構，輕輕晃動培養(yǎng)皿使擬胚體均勻分布在培養(yǎng)皿中繼續(xù)培養(yǎng)。
3.5.2懸浮培養(yǎng)法制備擬胚體
3.6換液
換液頻率：使用懸滴法制備擬胚體,將懸滴接入非貼壁型培養(yǎng)皿繼續(xù)培養(yǎng)后，每2-3天換一次液；使用懸浮培養(yǎng)法制備擬胚體，大約在第3天形成明顯的擬胚體結構，可進行初次換液，后續(xù)每2-3天換一次液;
換液方法：將需換液的擬胚體懸液轉移至15mL/50mL離心管中，靜置約3min,待擬胚體沉降至管底，吸掉上清，加入室溫平衡好的人多能干細胞分化培養(yǎng)基，用巴士滴管輕輕轉移至非貼壁型培養(yǎng)皿中，輕輕晃動培養(yǎng)皿使之均勻分布在培養(yǎng)皿中，37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
質量控制
關鍵字： 多能干細胞、多能干細胞分化培養(yǎng)基;
上海埃澤思生物科技有限公司（ Applied Cell?）專注于治療用及生產(chǎn)用細胞培養(yǎng)產(chǎn)品研發(fā)與生產(chǎn)，目前公司產(chǎn)品已經(jīng)涵蓋干細胞、免疫細胞培養(yǎng)，凍存以及分離等領域。為保證產(chǎn)品標準化、一致性，我們對所有產(chǎn)品進行嚴格的原料篩選及生產(chǎn)控制。目前，我公司已通過ISO9001：2015質量管理體系認證。除提供產(chǎn)品支持，本公司的技術團隊還可為您提供及時有效的技術支持、技術咨詢，以及與您探討感興趣的科學問題和解決方案。最終我們希望通過高品質的產(chǎn)品及服務，不斷推動細胞治療、再生醫(yī)學以及藥物發(fā)展與創(chuàng)新，愿我們早日成為您在研發(fā)科研及應用領域的忠誠合作伙伴。
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