人多能干細(xì)胞分化培養(yǎng)基
一、產(chǎn)品基本信息
產(chǎn)品名稱 | Applied Cell?人多能干細(xì)胞（ES/iPS）分化培養(yǎng)基 |
貨 號(hào) | AC-1001002 |
規(guī) 格 | 490mL+10mL |
保存條件 | 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 2-8℃，添加劑-20～-80℃；混勻后 2-8℃，2 周內(nèi)使用完畢。 |
使用范圍 | 人多能干細(xì)胞誘導(dǎo)分化，擬胚體形成 |
保質(zhì)期 | 12 個(gè)月 |
二、產(chǎn)品簡介
人多能干細(xì)胞分化培養(yǎng)基是埃澤思生物科技有限公司（Applied Cell?）研發(fā)的一款適用于人多能干細(xì)胞誘導(dǎo)分化的培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基可用于 EB（擬胚體）的形成。擬胚體是人多能干細(xì)胞在懸浮培養(yǎng)條件下形成的球狀結(jié)構(gòu)，可用于細(xì)胞多能性檢測，形成擬胚體可驗(yàn)證細(xì)胞分化潛能。
三、產(chǎn)品特性
l 誘導(dǎo)人多能干細(xì)胞（ES/iPS）形成擬胚體
四、產(chǎn)品內(nèi)容
試劑 | 規(guī)格 | 數(shù)量 | 運(yùn)輸 |
hPSC Differentiation Basal Medium 人多能干細(xì)胞分化-基礎(chǔ)培養(yǎng)基 | 490mL | 1 瓶 | 冰袋 |
hPSC Differentiation Supplement 人多能干細(xì)胞分化-添加劑 | 10mL | 1 瓶 | 干冰 |
五、相關(guān)產(chǎn)品
人 多 能 干 細(xì) 胞 培 養(yǎng) 基 （Applied Cell?: Cat. no.AC-1001000） Advance 人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基（Applied Cell?: Cat. no.AC-1001001） 人多能干細(xì)胞分化培養(yǎng)基（Applied Cell?: Cat. no.AC-1001002）
人多能干細(xì)胞消化液（Applied Cell?: Cat. no.AC-1001008）
即用型基質(zhì)膠（Applied Cell?: Cat. no.AC-1001007）
六、操作方法實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
1. 人多能干細(xì)胞分化培養(yǎng)基配制：
1.1. 在 2-8℃解凍人多能干細(xì)胞分化添加劑，輕晃搖勻；
1.2. 隨后將添加劑加入到人類多能干細(xì)胞分化基礎(chǔ)培養(yǎng)基中（每 10mL 添加劑與 500mL 分化基礎(chǔ)培養(yǎng)基徹底混合）混勻即為人多能干細(xì)胞分化培養(yǎng)基（AC-1001002）。人多能干細(xì)胞分化培養(yǎng)基 可在 2-8℃穩(wěn)定儲(chǔ)存 2-3 周。
注意：人多能干細(xì)胞分化添加劑只能在 2-8℃解凍，可按實(shí)際用量對添加劑進(jìn)行分裝，分裝后立即使用或儲(chǔ)存于-20℃至-80℃保存。
1.3. 人多能干細(xì)胞分化培養(yǎng)基使用前建議在室溫平衡 10-20min，不建議在 37℃加熱。
七、實(shí)驗(yàn)操作(以 6 孔板為例)
1. 在顯微鏡下觀察人多能干細(xì)胞，確認(rèn)細(xì)胞匯合度達(dá)到 70–80%，準(zhǔn)備傳代。
2. 清洗：拿出培養(yǎng)板,吸掉原有培養(yǎng)基，沿培養(yǎng)皿邊緣緩慢加入 37℃預(yù)熱 PBS 緩沖液，輕輕晃動(dòng)沖洗， 然后吸去 PBS 緩沖液；
3. 消化：在培養(yǎng)板中加入 1.5mL 人多能干細(xì)胞消化液（AC-1001008）使之覆蓋皿底，并置于 37℃， 5%CO2 培養(yǎng)箱中孵育 2~5 min；
4. 吹打：吸掉人多能干細(xì)胞消化液（AC-1001008）后，立刻加入室溫平衡好的人多能干細(xì)胞分化培 養(yǎng)基，用移液槍扇形吹打培養(yǎng)皿底，吹打次數(shù)保持在 3~5 次，使皿底貼附的干細(xì)胞集落脫落，輕柔緩慢吹吸混勻，制成干細(xì)胞懸液；
注意：吹吸皿底細(xì)胞的力度要輕柔，吹打脫落和吹吸混勻的次數(shù)在 3~5 次為宜，盡量避免形成單細(xì)胞。如有少量細(xì)胞無法從皿底脫落，屬于正常現(xiàn)象。如有大量細(xì)胞無法從皿底脫落，需延長消化時(shí)間。
5. 制備擬胚體
5.1. 懸滴培養(yǎng)法制備擬胚體
稀釋：將細(xì)胞懸液稀釋，細(xì)胞密度約為 1-2×105cells/mL；
制備懸滴：將稀釋好的細(xì)胞懸液以 30-50uL/滴(3000-7000 cells/滴),均勻接種在培養(yǎng)皿皿蓋內(nèi)面， 翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿蓋將其扣回加有 PBS 的培養(yǎng)皿上（加入 PBS 防止懸滴蒸發(fā)），放入 37℃，5%CO2 箱中培養(yǎng)；3-4 天后，非貼壁型培養(yǎng)皿中預(yù)先加入人多能干細(xì)胞分化培養(yǎng)基，將培養(yǎng)皿蓋上的懸滴轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中（6cm 培養(yǎng)皿加入 3-4mL 培養(yǎng)基)中，可觀察到明顯的擬胚體結(jié)構(gòu)，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)皿使擬胚體均勻分布在培養(yǎng)皿中繼續(xù)培養(yǎng)。
5.2. 懸浮培養(yǎng)法制備擬胚體
A. 稀釋：將細(xì)胞懸液稀釋，細(xì)胞密度約為 2-5×105cells/mL； B.接種：將稀釋好的細(xì)胞懸液接種至非貼壁型培養(yǎng)皿內(nèi)。
5.3. 換液
A. 換液頻率：使用懸滴法制備擬胚體,將懸滴接入非貼壁型培養(yǎng)皿繼續(xù)培養(yǎng)后，每 2-3 天換一次液；
使用懸浮培養(yǎng)法制備擬胚體，大約在第 3 天形成明顯的擬胚體結(jié)構(gòu)，可進(jìn)行初次換液，后續(xù)每 2-3 天換一次液;
B. 換液方法：將需換液的擬胚體懸液轉(zhuǎn)移至 15mL/50mL 離心管中，靜置約 3min,待擬胚體沉降至管底，吸掉上清，加入室溫平衡好的人多能干細(xì)胞分化培養(yǎng)基，用巴士滴管輕輕轉(zhuǎn)移至非貼壁型培養(yǎng)皿中，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)皿使之均勻分布在培養(yǎng)皿中，37℃，5%CO2 培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
八、擬胚體形態(tài)圖
擬胚體形態(tài)圖
九、質(zhì)量控制
檢驗(yàn)項(xiàng)目Test Catagories | 參考數(shù)據(jù)Reference Data |
外觀 Physical Appearance | 橙紅色液體 Orange-red Liquid |
澄清度Clarity | 澄清Clear |
pH 值 pH Value | 7.0-7.4 |
滲透壓Osmolality | 270-340 （mosm/KgH2O） |
無菌 Sterility | 無菌 Sterility |
支原體Mycoplasma | 0.11um 過濾，支原體試驗(yàn)為陰性 The mycoplasma test was negative after 0.11um filtration |
細(xì)胞生長試驗(yàn)Cell Growth Test | 細(xì)胞呈克隆狀，克隆邊緣光滑 The cells are clonal, with smooth edges |
關(guān)鍵字： 人多能干細(xì)胞分化培養(yǎng)基; Essential 8 系統(tǒng)培養(yǎng);埃澤思干細(xì)胞培養(yǎng)基;驗(yàn)證細(xì)胞分化潛能;
埃澤思生物總部位于上海，公司取名Applied Cell(應(yīng)用細(xì)胞)，是一家致力于為細(xì)胞治aize 療、再生埃澤思生物總部位于上海，公司取名AppliedCell(應(yīng)用細(xì)胞)，是一家致力于為細(xì)胞治療、再生醫(yī)學(xué)提供核心原料，以及研發(fā)服務(wù)（CRO ）和生物藥委托開發(fā)生產(chǎn)服務(wù)（CDMO）的生物科技公司。目前公司產(chǎn)品已經(jīng)涵蓋干細(xì)胞、免疫細(xì)胞治療全流程試劑原料。其中核心產(chǎn)品已經(jīng)完成美國FDADMF備案以及國家藥品評審中心（CDE）藥物原輔料備案，是國內(nèi)資質(zhì)最為齊全的細(xì)胞治療原料供應(yīng)商之一。目前，公司已與國內(nèi)6家細(xì)胞治療企業(yè)進(jìn)行細(xì)胞治療一類新藥聯(lián)合申報(bào)，一項(xiàng)日本一類新藥聯(lián)合申報(bào)。