化學名

1-[(3-hydroxyphenyl)methyl]-3-(4-pyridin-4-yl-1,3-thiazol-2-yl)urea

簡稱

RKI-1447

別名

RKI1447, RKI 1447

中文名

N/A

化學式

C₁₆H₁₄N₄O₂S

分子量

326.37

CAS號

1342278-01-6

純度

98%

溶劑/溶解度

Water<1mg/ml; DMSO65mg/ml; Ethanol<1mg/ml

溶液配制

5mg加入1.53ml DMSO，或者每3.26mg加入1ml DMSO，配制成10mM溶液。SC6664-10mM用DMSO配制。

產品描述

RKI-1447是一種有效的ROCK1和ROCK2抑制劑，IC50分別為14.5nM和6.2nM，有抗侵入和抗腫瘤活性。

信號通路

Cell Cycle; TGF-beta/Smad; Stem Cells & Wnt

靶點

ROCK2

ROCK1

－

－

－

IC50

6.2nM

14.5nM

－

－

－

體外研究

RKI-1447是一種細胞滲透性pyridylthiazolyl-尿素，作為一種有效的，ATP位點靶向Rho激酶抑制劑，并顯示針對PKA、PKN1/PRK1、p70S6K/RPS6kB1、AKT1、MRCKa/CDC42BPA的多效價降低(在1μM時抑制率分別為85.5%、80.5%、61.9%、56.0%和50.4%)或其它15種激酶。該RKI-1447/ROCK1復合物的晶體結構表明RKI-1447是I型激酶抑制劑，通過與鉸鏈區(qū)和DFG基序和ATP結合位點結合。在人類癌細胞中，RKI-1447抑制ROCK底物MLC-2和MYPT-1的磷酸化，而在濃度高達10μM時對AKT，MEK和S6激酶的磷酸化水平沒有影響。RKI-1447也抑制LPA刺激下ROCK-介導的細胞骨架重組(肌動蛋白應力纖維形成)，但不影響PDGF和血管舒緩激肽刺激下PAK-介導的偽足和絲狀偽足形成。RKI-1447抑制乳腺癌細胞的遷移，侵襲和錨定非依賴性腫瘤的生長。

體內研究

在轉基因小鼠模型中，RKI-1447有效抑制乳腺腫瘤的生長。小鼠腫瘤用RKI-1447處理時，腫瘤體積增加的平均百分比僅為8.8%。因此，RKI-1447抑制乳腺腫瘤的生長87%，并且和對照小鼠相比，乳腺腫瘤小7.7倍。RKI-1447治療不會導致小鼠體重減輕。

臨床實驗

N/A

特征

N/A

酶活性檢測實驗

方法

激酶的抑制是使用Invitrogen公司的Z-萊特? FRET激酶試驗測定的，絲氨酸/蘇氨酸13肽底物是基于肌球蛋白輕鏈序列KKRPQRRYSNVF的。化合物進行8點稀釋并做復孔，并進行三次獨立實驗以確定平均IC50值。測定條件進行了優(yōu)化，15微升激酶反應體系中含5納克酶在50mM HEPES(pH 7.5)，10毫摩爾氯化鎂，1mM EGTA和0.01% Brij-35。將反應物溫育在室溫下1小時，1.5μM多肽底物和12.5μM的ATP(為ROCK1)或2μM底物和50μM的ATP(為ROCK2)。然后將反應停止，并且磷酸化多肽對非磷酸化多肽的比例由非磷酸化肽的選擇性裂解來確定。隨后香豆素在400nM發(fā)射導致在445nM激發(fā)，且能量轉移到熒光素并最后發(fā)射在520nM。該底物包含香豆素和熒光素，只有未切割磷酸化底物將發(fā)生FRET。445nM和520nM處的信號比是使用Wallac的EnVision讀板儀(型號為2102平板讀數(shù)器)測量的。

細胞實驗

細胞系

MDA-MB-231

濃度

~600μM

處理時間

72小時

方法

細胞接種在96孔組織培養(yǎng)板(每孔1200個細胞)，并孵育24小時。孵育后，細胞用空白或不同濃度梯度的RKI-1447處理72小時。溫育后，新制備的MTT(2mg/ml)加入到每孔中，并溫育3小時。孵育后在540nM處讀板。

動物實驗

動物模型

MMTVneu轉基因小鼠[FVB/N-Tg (MMTVneu) 202 Mul/J]

配制

20% 2-羥丙基-β-環(huán)糊精(HPCD)

劑量

200毫克/千克/天

給藥方式

腹腔注射

產品編號

產品名稱

包裝

SC6664-10mM

RKI-1447 (ROCK抑制劑)

10mM×0.2ml

SC6664-5mg

RKI-1447 (ROCK抑制劑)

5mg

SC6664-25mg

RKI-1447 (ROCK抑制劑)

25mg

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說明書

1份