Reverse Transcriptase M-MLV（RNase H-）
M-MLV反轉錄酶(RNase缺失)
● 產品貨號及規(guī)格：
● 產品簡介：
M-MLV反轉錄酶(RNase H-)，是一種經過改造和優(yōu)化的反轉錄酶。和普通的M-MLV反轉錄酶相比，缺失了Ribonuclease H (RNase H)酶活性，不能夠選擇性剪切RNA和DNA雜合雙鏈中的RNA，可以合成長片段從DNA。
本產品中M-MLV反轉錄酶(RNase H-)的濃度為200U/μl，用于體積為20微升的反轉錄體系時足夠進行10次反轉錄反應。
特點：M-MLV反轉錄酶(RNase H-)可以合成長達9-13kb的cDNA。該反轉錄酶的最適反應溫度為42-45℃并且在55℃時仍然有很高活性，可以避免普通的M-MLV反轉錄酶(RNase H-)在37℃反應時的一些不足。
用途：M-MLV反轉錄酶(RNase H-)常用于在獲得總RNA或mRNA后cDNA條鏈的合成。合成的cDNA條鏈后續(xù)可以用于PCR、real-time PCR、cDNA第二條鏈的合成等。
來源：該反轉錄酶(RNase H-)由大腸桿菌表達
活性定義：One unit of the enzyme incorporates 1 nmol of dTMP into a polynucleotide fraction in 10 min at37℃. Enzyme activity is assayed in50 mMTris-HCl (pH 8.3),6 mMMgCl2,10 mMDTT,40 mMKCl,0.5 mMdTTP, 0.4 MBq/ml [3H]-dTTP0.4 mMpolyA•oligo(dT)12-18.
純度：不含DNA內切酶、外切酶和磷酸酯酶和RNA酶，可以滿足常規(guī)反轉錄合成cDNA條鏈等的需要。
酶儲存溶液：50 mMTris, pH 8.3,100mMNaCl,1 mMEDTA,5 mMDTT, 0.1% Triton X-100 and 50% glycerol。
5×RT buffer：250 mMTris, pH 8.3 at25℃,250 mMKCl,20 mMMgCl2,50 mMDTT。
失活或抑制：70℃孵育10分鐘可以導致M-MLV反轉錄酶(RNase H-)失活；EDTA、EGTA等螯合劑、無機磷酸鹽或焦磷酸鹽以及聚氨(polyamine)對該反轉錄酶(RNase H-)有抑制作用。
● 使用說明：
cDNA鏈合成：
1. 0.2ml PCR管中配制模板/引物變性混合液：
Oligo(dT)12-18 primer(50 μM)
or Random primer(25 μM)
or Specific primer(10 μM)
注：* Total RNA 的使用量一般為1 ng-1 μg；mRNA的使用量一般為 10 pg-1 μg。
2.70℃保溫 10 分鐘后迅速在冰上急冷 2 分鐘以上。
注：此步驟是打開RNA的一些比較穩(wěn)定的二級結構。
3. 離心數秒鐘使模板 RNA/引物的變性混合液聚集于離心管底部。
4. 在上述離心管中配制下列反轉錄反應液。
關鍵字： 反轉錄酶_PCR相關_PCR_
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