pfu DNA Polymerase
高保真平末端DNA聚合酶
● 貯存
-20℃保存一年。
● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
pfu DNA Polymerase是嗜熱古細(xì)菌來(lái)源的DNA聚合酶，該酶除具有5’-3’DNA聚合酶活性外，還具有很強(qiáng)的3’-5’外切酶活性，增強(qiáng)了PCR擴(kuò)增的保真度。與Taq酶相比，pfu聚合酶熱穩(wěn)定性更好，更能忍耐較高的變性溫度。Pfu的保真性是Taq DNA聚合酶的10-15倍。延伸速度為0.5kb/分鐘。PCR產(chǎn)物3’端不帶堿基A，為平滑末端，要通過(guò)平滑末端克隆法進(jìn)行克隆。
● 產(chǎn)品組成（RTH3102-02）
pfu DNA Polymerase（2.5U/μl） 40μl
10×pfu PCR buffer（含Mg2＋） 1ml
● 活性定義
1單位(U) pfu DNA Polymerase活力定義為在74℃、30分鐘內(nèi)，以活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，將10 nmol脫氧核苷酸摻入到酸不溶物質(zhì)所需的酶量。
● 酶貯存緩沖液
50 mM Tris-HCl (pH 8.0); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50 mM KCl ; Stabilizers; 50% glycerol
● 適用范圍
高保真的DNA片段的擴(kuò)增、DNA片段的平滑化。
● 使用說(shuō)明：
1. 按照下表在0.2ml PCR管中制備反應(yīng)體系：
注1：如果需要改變Mg2+濃度，根據(jù)下表調(diào)節(jié)
注2：配制反應(yīng)液時(shí)，請(qǐng)最后加入pfu，因?yàn)楸久赣泻軓?qiáng)的3’-5’外切酶活性，有可能降解引物。
2. 混勻后，離心快甩將反應(yīng)液收集到管底。
3. PCR儀如果沒(méi)有熱蓋加熱的話，補(bǔ)加25μl礦物油。
4. PCR儀上執(zhí)行以下程序：
*注： PCR 反應(yīng)條件視模板、引物等的結(jié)構(gòu)條件不同而各異。在實(shí)際操作中需根據(jù)模板、目的片段的大小、堿基序列和引物的長(zhǎng)短等具體情況，設(shè)定的反應(yīng)條件（溫度、時(shí)間等）。
關(guān)鍵字： PFU DNA聚合酶_PCR相關(guān)_PCR_
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