AMV 反轉(zhuǎn)錄酶 5×反應(yīng)緩沖液(M515A):與 AMV 反轉(zhuǎn)錄酶一起提供的 5×反應(yīng)緩沖液的組成為:250mM Tris-HCl(pH8.3 ,25℃),250mM KCl,50mM MgCl2,2.5mM 亞精胺和 50mM DTT。
酶儲(chǔ)存液:AMV 反轉(zhuǎn)錄酶(AMV-RT)
儲(chǔ)存液組成為:200mM 磷酸鉀(pH7.2 ,4℃),0.2% Triton X?-100,2mM DTT 和 50% 甘油。
來源:酶純化于禽成髓細(xì)胞瘤病毒顆粒。
儲(chǔ)存條件:保存于-20℃。避免反復(fù)凍融,切忌暴露于溫度頻繁變化的環(huán)境。請(qǐng)注意查看產(chǎn)品標(biāo)簽上的 過期日期。
活力單位定義:在 37℃下,10 分內(nèi)催化轉(zhuǎn)化 1nmol 脫氧核苷酸為酸性可沉淀物質(zhì)所需的酶量即一個(gè)活 力單位。反應(yīng)條件為:50mM Tris-HCl(pH8.3),40mM KCl,8.75mM MgCl2, 10mM DTT,0.1mg/ml 乙酸化的 BSA ,1mM 放射性標(biāo)記的 dTTP 和 0.25mM poly(A):oligo(dT)。請(qǐng)注意查看產(chǎn)品標(biāo)簽上的活力單位濃度。
注意:
1. AMV 反轉(zhuǎn)錄酶 5×緩沖液僅用于 cDNA 鏈的合成,它不含有脫氧核苷酸,因此不能替換 Promega 的 RiboClone AMV RT First-Strand 5×buffer(Part # C121A),C121A 為 Universal RiboClone cDNA System(目錄號(hào) C4360)中的一個(gè)組份,含有四種 dNTP。Promega 的 Access RT-PCR System(目錄 號(hào) A1250)是使用 AMV 反轉(zhuǎn)錄酶和 Tfl DNA 聚合酶,把反轉(zhuǎn)錄和 PCR 整合為一步而無須中間操作的 試劑盒,其中的緩沖液與 AMV 反轉(zhuǎn)錄酶 5×反應(yīng)緩沖液組份不同,所以這兩種緩沖液也是不能互 相替換的。
2. AMV 反轉(zhuǎn)錄酶 5×緩沖液不能用于 M-MLV 反轉(zhuǎn)錄酶。
3. 如果你將使用Taq DNA Polymerase 于 PCR 反應(yīng),那么可以直接加入體積在 10ul 以內(nèi)的本反轉(zhuǎn)錄反 應(yīng)混合物。如果你使用的是 GoTaq? DNA Polymerase(目錄號(hào) M3001)或 PCR Master Mix(目錄號(hào) M7501)那么可以直接加入 25ul 以內(nèi)的本反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)混合物于 50ul PCR 體系中。
關(guān)鍵字: (Promega原裝).;分子生物學(xué)
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