一、CBA流式多因子檢測原理介紹
CBA(Cytometric Bead Array)技術(shù)是基于包被抗體的微球并利用流式細(xì)胞儀同時對多種蛋白質(zhì)進(jìn)行定量分析的創(chuàng)新性技術(shù)。它是一系列不同熒光強(qiáng)度、各自包被不同捕獲抗體的微球，在同一反應(yīng)中與少量樣本混合孵育來捕獲相應(yīng)抗原，再與帶熒光標(biāo)記的第二種抗體以雙抗夾心的結(jié)合方式，用流式細(xì)胞儀來檢測區(qū)別不同微球，再分析每個微球上的定量抗原的熒光素強(qiáng)度，根據(jù)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)蛋白和對應(yīng)的熒光強(qiáng)度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，來擬合計算未知樣本中的相應(yīng)抗原濃度。
Cytometric Bead Array（CBA），即細(xì)胞因子微球檢測技術(shù)。是一種基于流式細(xì)胞檢測系統(tǒng)的多重蛋白定量檢測方法，它能夠同時對單個樣品中的多個指標(biāo)進(jìn)行檢測。BD公司利用流式細(xì)胞儀可對熒光信號進(jìn)行級數(shù)放大的特性，將受檢的可溶性因子附著于一些具有近似細(xì)胞直徑的微粒上，即可對受檢樣品中的各種可溶性因子進(jìn)行檢測。 CBA的基本原理近似于ELISA的檢測，即利用微小、分散的顆粒捕獲液體待測物，并利用流式細(xì)胞儀檢測類似“三明治”的顆粒——待測物復(fù)合體所散發(fā)的熒光，從而測定待測物的數(shù)量。
每個CBA微球大小一致，具有特定的熒光強(qiáng)度，包被有適用于特定分析（如其它抗體或者可溶性蛋白）的特異性捕獲抗體（Capture Antibody），提供了類似ELISA孔板的捕獲表面。當(dāng)微球和待測樣品溶液混合后，微球上的特異性抗體就與樣品（血清、血漿或者細(xì)胞培養(yǎng)液）中相應(yīng)的抗原或蛋白結(jié)合，然后加入熒光標(biāo)記的檢測抗體，就會形成“三明治”夾心復(fù)合物。最后通過流式細(xì)胞儀對特異性目的蛋白進(jìn)行檢測。CBA的每種微球攜帶有不同強(qiáng)度的紅色熒光，在流式細(xì)胞儀的FL3通道通過檢測微球熒光強(qiáng)度的差異對目的蛋白定性；檢測抗體帶有PE熒光素標(biāo)記，在流式細(xì)胞儀的FL2通道檢測，通過檢測抗體的PE熒光強(qiáng)度定量目的蛋白。
二、CBA技術(shù)特點
CBA是集ELISA和細(xì)胞流式技術(shù)優(yōu)點為一身的液相蛋白檢測技術(shù)。CBA的每一種微球提供一種蛋白的捕獲表面，捕獲微球與待測樣品后，呈懸浮態(tài)，與ELISA相比，能更有效地捕獲被分析物；CBA具有FCM的寬范圍熒光檢測特點，對樣本需求量更少，檢測更快速、更準(zhǔn)確。CBA主要的技術(shù)特點:
1、輕松實現(xiàn)多重檢測。最多可同時對一個樣本中的75個目的蛋白進(jìn)行精確定量。
2、樣本需要量小。僅需要50μL溶液就可進(jìn)行一次檢測。
3、更高的靈敏度。分析靈敏度高達(dá)2.8pg/mL。
4、更高的靈敏度、更寬的檢測范圍和更好的重復(fù)性。CBA技術(shù)使蛋白定量的分析靈敏度高達(dá)pg/ml級別,檢測范圍達(dá)0-5000pg/ml，所有分析只需一組標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)抗體的熒光強(qiáng)度對目的蛋白定量，排除了ELISA反應(yīng)中酶聯(lián)放大產(chǎn)生的假陽性。
5、檢測對象的靈活組合—BD CBA Flex Set。CBA kit是同時檢測試劑盒配好的6個指標(biāo)，形式比較固定。為滿足不同客戶的實際需要和研究興趣，BD于2005年初推出了CBA Flex set。它改變了CBAkit的固定形式，成為自由組合、靈活搭配的“自助餐”。您可以根據(jù)需要組合不同的捕獲微球來檢測多個指標(biāo)，最多能同時檢測75個指標(biāo)。除了擁有CBA kit的優(yōu)勢外，F(xiàn)lex Set還配有獨立的軟件分析系統(tǒng)（CBA Flex Set Analysis Software），并且可以在BD FACSArray Bioanalyzer上，直接用96孔和384孔板進(jìn)行操作。CBA Flex set賦予研究者更靈活、更自由，更大的選擇空間，而且進(jìn)一步豐富了CBA產(chǎn)品線。種類涉及免疫、細(xì)胞信號傳導(dǎo)、細(xì)胞凋亡等許多領(lǐng)域的蛋白定量分析。
6、操作簡單，省時省力。CBA技術(shù)采用芯片式集成測定，所有檢測只需一組標(biāo)準(zhǔn)曲線，就可計算出每種待測蛋白濃度；操作簡單，整個流程只需要3.5小時，對待測樣本可做實時分析，縮短檢測了時間，提高了檢測效率。
7、強(qiáng)大的軟件分析系統(tǒng)。BD CBA軟件具有強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理能力，直接將目標(biāo)蛋白的檢測結(jié)果換算成標(biāo)準(zhǔn)濃度；除了為用戶提供待測物的計數(shù)結(jié)果外，還能提供可視輪廓或信號圖形以幫助用戶獲得更多的信息。有用于Macintosh和Microsoft系統(tǒng)兩種版本供您選擇。和傳統(tǒng)的液相蛋白定量技術(shù)相比，CBA技術(shù)是一種“多元”和“同步”的檢測技術(shù)。CBA應(yīng)用：自CBA上市以來，越來越多的科研和臨床研究人員將CBA應(yīng)用于他們的領(lǐng)域。CBA應(yīng)用領(lǐng)域涉及眼淚、血清、唾液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等樣本中細(xì)胞因子、炎癥因子的水平的分析。CBA還用于細(xì)胞信號傳導(dǎo)中磷酸化蛋白、凋亡相關(guān)蛋白分析，系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）和新生兒膿血癥等免疫疾病的監(jiān)控，腫瘤研究，藥物對病人的治療效果評估，藥物研發(fā)，疫苗研究，總體免疫功能分析等多領(lǐng)域。革新的CBA技術(shù)與傳統(tǒng)的蛋白定量相比有下列優(yōu)點：
檢測優(yōu)點：（與ELISA相比）
1、所需要的樣本量?。核械闹笜?biāo)同時檢測最多只需50ul樣本。
2、節(jié)省檢測時間和工作量：所有指標(biāo)同時檢測只需一個流程，操作簡便，有自動分析軟件處理數(shù)據(jù)。
3、同時檢測的目的蛋白多，選擇自由度大：實際檢測中可同時自由組合30個指標(biāo)，可將感興趣的指標(biāo)都加進(jìn)去。
傳統(tǒng)ELISA
流式CBA檢測技術(shù)
每項實驗樣本用量50-200ul
樣本用量少于50ul
實驗時間大于24h
流式細(xì)胞儀自動檢測，標(biāo)準(zhǔn)曲線自動測定，專用軟件自動計算