探針法作為microRNA定量研究的金標(biāo)準(zhǔn)，具有高特異性、高靈敏度的優(yōu)勢(shì)。Biorab的TaqMan miRNA定量PCR試劑盒，采用特異性的正向miRNA引物和接頭引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，檢測(cè)熒光基團(tuán)采用FAM標(biāo)記的TaqMan探針。使用該試劑盒可以高特異性、高靈敏度的檢測(cè)低至100個(gè)細(xì)胞的miRNA分子，并可區(qū)分相似度極高的miRNAs。Biorab的TaqMan miRNA定量PCR試劑盒多達(dá)一萬(wàn)余種，試劑盒編號(hào)為MTTxxxxx，每一個(gè)mircoRNA分子對(duì)應(yīng)一個(gè)檢測(cè)試劑盒（包含特異性的TaqMan探針、正向引物、反向引物、定量試劑）。

TaqMan microRNA定量PCR試劑盒原理圖：


產(chǎn)品組成：

儲(chǔ)存：請(qǐng)置于-20℃，可保存2年；避免反復(fù)凍融。

檢測(cè)效果和應(yīng)用實(shí)例：

1．高靈敏度（最高可到0.1fM級(jí)水平)


2．高特異性，有效區(qū)分單堿基差異


3．應(yīng)用實(shí)例


內(nèi)參基因可選擇使用：
1．TaqMan RNU6B miRNA 定量 PCR 試劑盒（貨號(hào)：MTT01501）適用于人、鼠等哺乳動(dòng)物組織、細(xì)胞樣品；
2．TaqMan hsa-miR16 miRNA 定量 PCR 試劑盒（貨號(hào)：MTT01511）適用于來(lái)源于人、鼠全血樣品。

操作方法：

1．配制反應(yīng)體系根據(jù)機(jī)型選擇步驟A或B
步驟A：需要添加 ROX 染料進(jìn)行反應(yīng)孔間信號(hào)矯正的Real-Time PCR 儀，包括：ABI 7000/7300/7500/7900 等。按照如下組分配制 20μl PCR 反應(yīng)體系：

注意：cDNA 模板來(lái)自于 TaqMan miRNA 反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。
步驟B：無(wú)需添加 ROX 染料進(jìn)行反應(yīng)孔間信號(hào)矯正的Real-Time PCR 儀，包括：LightCycler（Roche)； MyiQ 2、CFX96 Real-Time PCR(Bio-Rad)；Line-Gene(杭州博日)等。按照如下組分配制 20μl PCR 反應(yīng)體系：

注意：cDNA 模板來(lái)自于 TaqMan miRNA 反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。

2．進(jìn)行 Real-Time PCR 反應(yīng)通常采用兩步法，程序如下：

收集信號(hào)采用FAM 染料通道，反應(yīng)結(jié)束后確認(rèn) Real-Time PCR的cDNA 樣品和 NTC 陰性對(duì)照的擴(kuò)增曲線。