2X 探針法qPCR Mix （TaqMan探針法熒光定量PCR試劑盒）1是基于熒光探針檢測的即用型PCR 試劑盒，可以對靶片段進(jìn)行實(shí)時定量PCR 分析（quantitative PCR、qPCR）。產(chǎn)品含有經(jīng)過優(yōu)化的緩沖液組分、熱啟動 Taq DNA 聚合酶、Taq DNA 穩(wěn)定劑、dNTPs、MgCl2 和穩(wěn)定劑等所有實(shí)時定量PCR 所需要的成分，用戶只需加入基因組DNA 或cDNA 模板、引物和探針即可進(jìn)行探針法實(shí)時定量PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途。本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn)：
1. 以2×Mix 提供，用戶只需準(zhǔn)備模板、引物、探針和ROX 染料（取決于qPCR 儀器）即可以進(jìn)行探針法實(shí)時定量PCR 實(shí)驗(yàn)，非常方便快捷，降低了操作誤差。
2. 各成分的濃度和比例都經(jīng)過精心優(yōu)化，反應(yīng)的靈敏度高，特異性強(qiáng)。靈敏度時可以達(dá)到50 拷貝/反應(yīng)（跟模板質(zhì)量，引物設(shè)計(jì)等相關(guān)）。
3. 既可用于 TaqMan 探針 qPCR，也可以是分子信標(biāo)（molecular beacon）探針 qPCR。
4. 靈敏度和專一性比染料法熒光定量PCR 更高。
5. 可用于基因表達(dá)分析、SNP 分析、拷貝數(shù)分析等實(shí)驗(yàn)。也可以用于定性檢測。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研，1mL 足夠 100 次 20uL 體系的探針法 qPCR 反應(yīng)。
自備陽性對照模板（6 各梯度）
不加
各 1 uL（各
加 1 個梯度）
陰性對照模板（一般用水）
1 uL
自備探針（0.5uM）
各 1 uL
自備 50×自備 ROX I 或 ROX II
染料（見注）
各 0.4 uL
0.4 uL
補(bǔ)超純水到
20 uL
注，下列信息僅供參考，具體以 qPCR 儀器的使用手冊為準(zhǔn)。
1、不需要 ROX 的機(jī)型：Agilent MX3000 和 MX4000、iCycler IQ、LightCycler 480、，、 Smart Cycler System、Thermal Cycler Dice Real Time System 等型號的熒光 PCR 儀器不需要加 ROX 染料，但加入的話也不會影響整個 PCR 分析。
2、需要使用 ROX I 的機(jī)型：ABI Prism7000、7300、7700、7900HT、Step One、 Step One Plus。
3、需要使用 ROX II 的機(jī)型：ABI Prism7500、7500 Fast、MJ Opticon、MJ Chromo4、 Corbett RotorGene 3000。
2. 放入熒光 PCR 儀中進(jìn)行擴(kuò)增, 下表的擴(kuò)增參數(shù)僅供參考，一定需要根據(jù)靶分子長度，引物和探針的 Tm 值、標(biāo)記染料的種類等進(jìn)行調(diào)節(jié)。一般選擇三步法 PCR：
如果引物 Tm 值接近 60℃，也可以選擇兩步法 PCR：
3. 數(shù)據(jù)處理
如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。
如果把2X 探針法qPCR Mix TaqMan探針法熒光定量PCR試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性。一般情況下，陰性對照 Ct 大于或等于 40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長，有典型擴(kuò)增曲線，Ct 值應(yīng)該小于或等于 30。對待測樣品，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性，如果小于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間，則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性，如果小
于 40，則為陽性。
染料法 qPCR MagicMix
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